【摘 要】
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目的 探讨来源于树突状细胞（DCs）的外泌体对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）炎症因子的作用和机制。方法 从C57BL/6J小鼠中分离获得骨髓树突状细胞（BMDCs）并培养，采用超速离心法分别从BMDCs及经脂多糖（LPS）诱导成熟的BMDCs培养基中分离获得外泌体、并经电镜扫描及免疫印迹法（WB）验证；构建CD63-GFP慢病毒载体并转染BMDCs细胞，Transwell共培养BMDCs细胞与HU
【基金项目】
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贵州省科技计划项目（黔科合基础[2019]1259）； 四川省科技厅重点研发项目（2020YFS0405）；
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目的 探讨来源于树突状细胞（DCs）的外泌体对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）炎症因子的作用和机制。方法 从C57BL/6J小鼠中分离获得骨髓树突状细胞（BMDCs）并培养，采用超速离心法分别从BMDCs及经脂多糖（LPS）诱导成熟的BMDCs培养基中分离获得外泌体、并经电镜扫描及免疫印迹法（WB）验证；构建CD63-GFP慢病毒载体并转染BMDCs细胞，Transwell共培养BMDCs细胞与HUVEC、并用外泌体处理细胞；应用ELISA法检测各组细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的浓度，蛋白质印迹法（Western blot）测试p100和p105的磷酸化水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）测试TNF-α和IL-6的mRNA表达水平，利用免疫荧光技术检测HUVEC摄取外泌体的情况。结果 激光共聚焦显微镜观察显示，HUVEC能摄取BMDCs来源的外泌体；通过LPS诱导的成熟和未成熟的BMDCs外泌体中的IL和TNF水平无统计学差异；BMDCs与HUVEC共同培养的培养基中IL-6和TNF-α的浓度和p100和p105的磷酸化水平比单纯培养HUVEC培养基中的表达明显升高（P＜0.05），但BMDCs外泌体被外泌体抑制剂GW4869抑制后，TNF-α和IL-6含量及p100和p105的磷酸化水平明显下降（P＜0.01）；共培养联合NF-κB抑制剂BAY11-7082组中的TNF-α和IL-6含量及p100和p105磷酸化水平比单纯HUVEC与BMDCs共培养组明显下降（P＜0.001）。结论 BMDCs来源的外泌体能够被HUVEC摄取，并促进HUVEC炎症因子TNF-α和IL-6升高，其机制可能与BMDCs来源的外泌体影响NF-κB信号通路中p100以及p105的磷酸化水平有关。
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