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目的 在大肠杆菌中表达抗人TNF-α单链抗体(ScFv)，并分析 它的结合活性和中和活性. 方法 在获 得抗人TNF-α E6ScFv的基础上，用热诱导载体pBV220在大肠杆菌中表达E6ScFv蛋白. ELIS A测定抗体的结合活性，实时BIA技术确定亲和常数，L929 细胞毒试验分析其中和活性. 结果 克隆了抗人TNF-α E6ScFv基因的热 诱导载体pBV220在大 肠杆菌中，经42℃热诱导，得到了相对分子质量(Mr)约为27 000的重组蛋白质，表达 量占菌体 总蛋白的18%. 对在大肠杆菌中表达的E6ScFv进行了复性和亲和层析纯化，并进一步证实： ①E6ScFv具有与hTNF-α结合的活性，其结合表位与亲本抗E6单克隆抗体(mAb)相同；②E6S cFv与hTNF-α的亲和常数为3.71×104 M-1；③E6ScFv具有中和hTNF-α细胞毒作 用的活性. 结论 以上结果有助于ScFv拮抗TNF-α的治疗.