【摘 要】
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目的 表达、纯化淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关糜蛋白酶(NYD-Ch)基因并进行酶活性分析. 方法 应用PCR和基因重组技术,构建原核表达载体,表达目的蛋白;用酶促底物法测定表达蛋白NY
【机 构】
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南京医科大学基础医学院病原生物学系,江苏南京,210029
【基金项目】
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国家自然科学基金;江苏省自然科学基金
论文部分内容阅读
目的 表达、纯化淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关糜蛋白酶(NYD-Ch)基因并进行酶活性分析. 方法 应用PCR和基因重组技术,构建原核表达载体,表达目的蛋白;用酶促底物法测定表达蛋白NYD-Ch的酶学活性和最适pH值. 结果 成功构建重组表达载体pET32a(+)/NYD-Ch,并转化到感受态菌E. coli BL21(DE3)中.SDS-PAGE和Western blot显示,目的蛋白分子质量与理论值相符.NYD-Ch最大活力通过S(Ala)2ProPhe-pNA获得.NYD-Ch活力随pH的增高而增大,在pH 8.01～11.0的范围内较高,pH 10.0时达最高.抑制剂PMSF、SBTI、TPCK对NYD-Ch酶活力均有明显的抑制作用. 结论 成功表达了NYD-Ch蛋白,并分析了其酶学活性.本结果为深入研究NYD-Ch与杀虫剂抗性关系奠定基础.
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