中国人β神经生长因子基因的分子克隆、序列分析及其在哺乳动物细胞中的分泌表达

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以正常人血淋巴细胞染色体DNA为模板,PCR扩增出短体前β神经生长因子(pre-pro-β-NGF)编码基因。将所得基因片段重组于M13噬菌体载体,筛选得到含中国人prepro-β-NGF基因的克隆。采用Sanger单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列,该序列与国外文献所报道的仅有一个碱基不同。将该基因亚克隆于真核表达载体pEV1,经转染哺乳动物细胞BHK后,在培养上清中检测到了成熟型β-NGF。 Using the normal human lymphocyte chromosome DNA as template, the pre-pro-β-NGF encoding gene was amplified by PCR. The resulting gene fragment was recombined on the M13 phage vector and the clone containing the Chinese prepro-β-NGF gene was screened. Sanger’s single-stranded terminator method was used to detect the complete nucleotide sequence of the nucleotide sequence, which is different from the one reported in foreign literature. The gene was subcloned into the eukaryotic expression vector pEV1, and after being transfected into mammalian cells BHK, mature β-NGF was detected in the culture supernatant.
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