【摘 要】
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目的应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型。方法采用Bioflex细胞培养板接种HT-22细胞,应用FX-5000TFL细胞应力加载系统进行牵张损伤(形变率为13.4%、频率为5.0 Hz)。并按照时间的长短分为对照组和6、12、24 h组。应用数字全息显微镜(DHM)动态检测细胞平均面积和平均厚度值,采用锥虫蓝染色法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞存活率和LDH的释放情况,并通过流式
【机 构】
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300162 天津,武警后勤学院附属医院脑科医院,武警部队脑创伤与神经疾病研究所,天津市神经创伤修复重点实验室,300162 天津,武警后勤学院附属医院脑科医院,武警部队脑创伤与神经疾病研究所,天津市
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目的应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型。
方法采用Bioflex细胞培养板接种HT-22细胞,应用FX-5000TFL细胞应力加载系统进行牵张损伤(形变率为13.4%、频率为5.0 Hz)。并按照时间的长短分为对照组和6、12、24 h组。应用数字全息显微镜(DHM)动态检测细胞平均面积和平均厚度值,采用锥虫蓝染色法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞存活率和LDH的释放情况,并通过流式细胞术检测细胞周期和Sub-G1期峰的变化。
结果(1)DHM检测结果显示:与对照组比较,损伤6 h后HT-22细胞面积由(603.9±28.5)μm2降至(182.9±4.5)μm2(t=21.93, P<0.01),细胞厚度由(4.0±0.2)μm升至(8.3±0.3)μm(t=16.65, P<0.01)。(2)细胞存活率结果显示:对照组细胞存活率为(95.0±1.6)%,而损伤后6 h[(59.7±4.5)%]较对照组显著下降(t=10.44, P<0.01)。损伤后12 h和24 h的细胞存活率[分别为(77.0±2.9)%、(85.0±3.3)%]虽较6 h组上升(分别为t=4.56, P<0.05;t=6.45, P<0.01),但仍低于对照组(分别为t=7.56, P<0.01;t=3.873, P<0.05)。(3)LDH检测结果显示:细胞应力加载损伤后6 h,LDH的释放水平[(273.9±4.6 )ng/L]显著高于对照组[(51.7±5.8 )ng/L,t=42.48, P<0.01],而12 h组和24 h组LDH的释放水平[分别为(255.2±4.4)ng/L、(240.2±6.0)ng/L]均低于6 h组(分别为t=4.14, P<0.05;t=6.28, P<0.01)。(4)流式细胞术检测结果显示:与对照组[(0.6±0.3)%]相比,损伤6 h组Sub-G1凋亡峰比例[(6.5±0.6)%]显著上升(t=14.90, P<0.01),而细胞死亡比例随时间的延长而减少,尤以损伤24 h后[(2.1±0.5)%]的峰值较6 h组降低最为显著(t=9.61, P<0.01)。
结论应用细胞应力加载系统成功建立HT-22体外细胞损伤模型,该模型重复性好,操作简便,为进一步研究颅脑创伤的病理生理机制提供了一种精确、有效、可控的模型制作方法。
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