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【摘要】 目的：研究丹参多酚酸盐对急性ST段抬高型心肌梗死急诊PCI患者术后MDA、NADPH氧化酶p22phox活性的影响，从而探讨其在氧化应激方面的作用。方法：选择83例急性ST段抬高型心肌梗死行急诊PCI治疗的患者，随机数字表法分为对照组37例和治疗组46例，对照组包括双抗血小板、抗凝、调脂等治疗，治疗组在对照组治疗的基础上+丹参多酚酸盐注射液200 mg/d静滴。分别测定入院即刻及治疗后2周的血清MDA（丙二醛）浓度水平、外周血吞噬细胞NADPH氧化酶（细胞还原型辅酶Ⅲ氧化酶）p22phox活性水平，分别比较两组患者入院时及治疗后2周以上各指标的变化，以及两组间治疗后的变化情况，同时观察药物不良反应。结果：（1）治疗组治疗后2周MDA水平、NADPH氧化酶p22phox活性水平较入院时均明显降低，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）对照组治疗后2周MDA、NADPH氧化酶p22phox活性水平较入院时均有降低趋势，但比较差异无统计学意义。（3）治疗组治疗后2周MDA水平、NADPH氧化酶p22phox活性较对照组明显降低，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：丹参多酚酸盐可明显降低血清MDA水平及外周血吞噬细胞NADPH氧化酶p22phox活性活性，其机制可能与抑制氧化应激有关。
【关键词】 丹参多酚酸盐； 急诊PCI； 丙二醛； 吞噬细胞NADPH氧化酶p22phox
【Abstract】 Objective：To study the effects of salvianolate on MDA， NADPH oxidase p22phox in patients with Primary Percutaneous Coronary Intervebtion， explore the role of salvianolate in retarding oxidative stress.Method：83 patients with Primary Percutaneous Coronary Intervebtion were divided randomly into therapy group（46 cases）and control group（37 cases）.Therapy group was treated with salvianolate （200 mg/d） and antiplatelet， anticoagulation， blood fat adjustment.And control group was treated with simple ntiplatelet， anticoagulation and blood fat adjustment.MDA， NADPH oxidase p22phox and adverse effect of salvianolate were observed on admission and 2 weeks after treatment.Result：（1） Expression of phagocytic NADPH oxidase p22phox and MDA in therapy group was both lower significantly after treatment （P<0.05）.（2） Expression of phagocytic NADPH oxidase p22phox and MDA of control group was lower after treatment， but the difference was not significant.（3） Expression of phagocytic NADPH oxidase p22phox and MDA of therapy group after treatment was lower significantly than that of control group （P<0.05）.Conclusion：Salvianolate could depress MDA and phagocytic NADPH oxidase p22phox， and its mechanism may be by retarding oxidative stress.
【Key words】 Salvianolate； Primary percutaneous coronary intervebtion； Malondialdehyde； Phagocytic NADPH oxidase p22phox
急性心肌梗死的发病率及就诊率逐年提高，急诊PCI术大大提高了患者生存率，然而慢复流或无复流现象成为影响患者生存率的重要问题，其机制尚不明确。急诊PCI术后氧化应激的增强对再灌注的影响是近年来学者关注的焦点，有学者研究发现丹参多酚酸盐可改善冠脉慢血流现象[1]，其机制尚待进一步研究。因此设立本课题，旨在从氧化应激的角度探讨丹参多酚酸盐的临床疗效。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2013年6月-2014年6月在临沂市沂水中心医院就诊的83例急性ST段抬高型心肌梗死行急诊PCI治疗的患者，随机数字表法分为治疗组46例，其中男29例，女17例，平均年龄（68.4±17.1）岁；和对照组37例，其中男24例，女13例，平均年龄（66.3±14.2）岁。对照组包括双抗血小板、抗凝、调脂等治疗，治疗组在对照组治疗的基础上+丹参多酚酸盐注射液200 mg/d静滴。急性ST段抬高型心肌梗死的诊断符合2010年中华医学会急性ST段抬高型心肌梗死诊断及治疗指南。本次研究经医院医学伦理委员会审核通过，入选研究对象均在知情同意下签署知情同意书。 1.2 研究方法
1.2.1 急诊PCI术 所有患者入院立即行急诊PCI术，时间窗均在6 h内，由经验丰富介入医师进行操作。
1.2.2 MDA测定 所有研究对象均于入院即刻及治疗后2周抽取肘静脉血各2 mL，分离血清用于MDA测定。采用双抗体夹心ABC-ELISA法。通过绘制标准曲线求出标本中MDA浓度。由上海西唐生物工程研究所提供试剂盒，按照说明书测定。
1.2.3 NADPH氧化酶p22phox活性测定 入院即刻及治疗后2周取肘静脉血各2 mL，采用明胶自然沉淀法联合红细胞裂解液法提取外周血吞噬细胞；硫氰酸胍一步法提取吞噬细胞总RNA；NADPH氧化酶p22phox（317bp）及GAPDH内参基因（572bp）的引物序列由上海生物工程技术服务有限公司提供。其中p22phox：上游 5’-TGGGCGGC TGCTTGATGGT-3’；下游5’-TGGGCGGCTGCTTGATGGT-3’；GAPDH mRNA：上游 5’-TCACCATCTTCCAGGAGCG-3’；下游 5’-CTGCTTCACCACCTTCTTGA-3’。PCR扩增体系采用50 μL反应体系。凝胶成像仪成像并保存结果。通过目的基因p22phox mRNA表达条带与内参条带的灰度比值比代表吞噬细NADPH氧化酶p22phox的表达水平。
1.3 统计学处理 所得数据使用SPSS 16.0软件包进行统计分析，符合正态分布的计量资料以（x±s）表示，符合正态分布且方差齐性两组间比较及两独立样本比较采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组治疗前后MDA水平的变化 治疗组治疗前后MDA水平分别为（2562.28±920.17）nmol/mL、
（1867.72±836.20）nmol/mL，对照组分别为（2448.41±872.81）nmol/mL、（2352.79±870.01）nmol/mL，
治疗组治疗后MDA水平较治疗前明显下降，比较差异有统计学意义（P<0.05），治疗组治疗后MDA水平较对照组治疗后明显下降，比较差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2 治疗组及对照组治疗前后p22phox活性的变化 治疗组治疗后NADPH氧化酶p22phox表达（0.61±0.30）较治疗前（0.98±0.45）明显下降，比较差异有统计学意义（P<0.05）（图1）。对照组治疗后NADPH氧化酶p22phox（0.88±0.32）与入院时（0.96±0.42）比较，差异无统计学意义。治疗组治疗后2周NADPH氧化酶p22phox活性较对照组治疗后明显降低，比较差异有统计学意义（P<0.05）（图2）。
3 讨论
良好的心肌再灌注是行PCI术的最终目标，也是改善患者预后的关键环节。目前研究表明，影响心肌再灌注的机制复杂，不能用单一的机制来防范和解决，而采用药物预防和治疗是研究的主要方向。氧化应激是近年来提出的影响PCI术后慢血流或无复流现象发生的重要机制之一[2-3]，近来动物实验研究发现丹参多酚酸盐预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有较好的防护作用[4]，可对抗心肌细胞凋亡的发生[5]，减少自由基的生成及增加对自由基的清除，再灌注损伤减轻，从侧面提示氧化应激对再灌注的影响[6]。NADPH氧化酶，是机体产生活性氧族的主要来源[7-8]，是参与氧化应激的主要的酶系，该途径促进大鼠心肌缺血再灌注氧化损伤[9]。MDA是脂质过氧化反应的产物之一，脂质过氧化在氧化应激研究中最为广泛，其水平高低常常可反映脂质过氧化的程度，间接地反映出机体细胞受自由基攻击的严重程度和细胞损伤的程度，是评价心肌缺血损伤的较好指标[10]。
本研究中，治疗组经治疗后NADPH氧化酶p22phox活性较治疗前明显降低，MDA水平下降，提示急性ST段抬高型心肌梗死患者经治疗后体内氧化应激水平下降，脂质过氧化水平降低，与张学军等[11]研究结论一致。而丹参多酚酸盐治疗组较对照组NADPH氧化酶p22phox活性及MDA水平下降更加明显，提示在常规治疗的基础上，加用丹参多酚酸盐可进一步抑制氧化应激的水平。丹参多酚酸盐可明显减弱NADPH氧化酶p22phox活性及降低MDA水平，在抑制氧化应激方面发挥重要作用，与相关研究结果一致[12]。对照组二者均有降低趋势，但差别无统计学意义，可能与PCI本身及时进行血运重建，且进行了规范的抗血小板、抗凝、调脂等治疗有关。且在丹参多酚酸盐的整个治疗过程中，无不良反应发生，提示丹参多酚酸盐临床用安全、有效。
中药丹参的成分可分为水溶性和脂溶性，而水溶性成分主要为酚类物质，对心血管疾病有益。而丹参多酚酸盐是酚类物质的高度纯化，其可降低急性ST段抬高型心肌梗死PCI术后氧化应激水平[13]，改善微循环，提高组织灌注，但潜含着多元化的药理作用机制[14]，其中之一可能与减弱吞噬细胞NADPH氧化酶p22phox的活性有关，但由于病例组发病机制本身较为复杂，氧化应激影响因素众多，尚需在以后的临床工作中进一步研究。
参考文献
[1]季俭，卢英民，姚能才，等.丹参多酚酸盐对冠状动脉慢血流的影响[J].临床心血管病杂志，2011，27（10）：751-752.
[2]范爱德.丹参川芎嗪注射液对PCI患者疗效及血清超敏C反应蛋白的影响[J].中国医学创新，2011，8（25）：3-5.
[3] Manabu K， Toshio I， Yuichi O.Differential exession of Toll-like receptor 4 and human monocyte subsets in acute myocardial infarctionpr[J].Atherosclerosis，2012，221（1）：249-253. [4]沈继龙，朱克军，李增男，等.丹参多酚酸盐预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的防护作用[J].临床心血管病杂志，2012，28（9）：707-710.
[5]周斌，赵芳，陈明，等.丹参多酚酸盐对高糖诱导的大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用[J].广东医学，2013，34（20）：3105-3108.
[6]张莹，黄国良.缬沙坦对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞氧化应激水平的影响[J].中国现代应用药学，2012，29（1）：11-15.
[7] Braunersreuther V， Jaquet V.Reactive oxygen species in myocardial reperfusion injury：from physiopathology to therapeutic approaches[J].Curr Pharm Biotechnol，2012，13（1）：97-114.
[8]孙彦，熊辉，宋俊，等.血清肿瘤标志物联合ROS、SOD、MDA、GSH-Px在消化道恶性肿瘤中的检测意义分析[J].中国医学创新，2012，9（16）：7-9.
[9]罗秀菊，吉少葵，刘斌，等.还原型辅酶Ⅱ氧化酶/血管过氧化酶途径促大鼠心肌缺血再灌注氧化损伤[J].中华心血管病杂志，2012，40（12）：991-996.
[10]李辉.丹参多酚酸盐对大鼠缺血再灌注损伤心脏、大脑组织中SOD、MDA的影响[J].中国实用神经疾病杂志，2012，15（17）：33-35.
[11]张学军，高鹏，闫吉霞，等.替罗非班对ST段抬高急性心肌梗死患者急诊PCI的疗效观察[J].中国医学创新，2011，8（23）：19-20.
[12]刘洋，邓兵，许嘉鸿，等.丹参多酚酸盐对急性心肌梗死患者介入治疗术后心肌组织灌注影响的临床研究[J].中国综合临床，2012，26（2）：121-126.
[13]叶名，艾辉，曾玉杰.丹参多酚酸盐对急性心肌梗死PCI术后患者血管内皮和血小板活化功能的影响[J].安徽医药，2014，（11）：2178-2181.
[14]吴燕燕，孙煜，王易，等.丹参多酚酸盐活血化瘀作用的多元化药理作用[J].中国现代应用药学，2010，27（11）：975-978.
（收稿日期：2014-09-28） （本文编辑：王宇）
【关键词】 丹参多酚酸盐； 急诊PCI； 丙二醛； 吞噬细胞NADPH氧化酶p22phox
【Abstract】 Objective：To study the effects of salvianolate on MDA， NADPH oxidase p22phox in patients with Primary Percutaneous Coronary Intervebtion， explore the role of salvianolate in retarding oxidative stress.Method：83 patients with Primary Percutaneous Coronary Intervebtion were divided randomly into therapy group（46 cases）and control group（37 cases）.Therapy group was treated with salvianolate （200 mg/d） and antiplatelet， anticoagulation， blood fat adjustment.And control group was treated with simple ntiplatelet， anticoagulation and blood fat adjustment.MDA， NADPH oxidase p22phox and adverse effect of salvianolate were observed on admission and 2 weeks after treatment.Result：（1） Expression of phagocytic NADPH oxidase p22phox and MDA in therapy group was both lower significantly after treatment （P<0.05）.（2） Expression of phagocytic NADPH oxidase p22phox and MDA of control group was lower after treatment， but the difference was not significant.（3） Expression of phagocytic NADPH oxidase p22phox and MDA of therapy group after treatment was lower significantly than that of control group （P<0.05）.Conclusion：Salvianolate could depress MDA and phagocytic NADPH oxidase p22phox， and its mechanism may be by retarding oxidative stress.
【Key words】 Salvianolate； Primary percutaneous coronary intervebtion； Malondialdehyde； Phagocytic NADPH oxidase p22phox
急性心肌梗死的发病率及就诊率逐年提高，急诊PCI术大大提高了患者生存率，然而慢复流或无复流现象成为影响患者生存率的重要问题，其机制尚不明确。急诊PCI术后氧化应激的增强对再灌注的影响是近年来学者关注的焦点，有学者研究发现丹参多酚酸盐可改善冠脉慢血流现象[1]，其机制尚待进一步研究。因此设立本课题，旨在从氧化应激的角度探讨丹参多酚酸盐的临床疗效。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2013年6月-2014年6月在临沂市沂水中心医院就诊的83例急性ST段抬高型心肌梗死行急诊PCI治疗的患者，随机数字表法分为治疗组46例，其中男29例，女17例，平均年龄（68.4±17.1）岁；和对照组37例，其中男24例，女13例，平均年龄（66.3±14.2）岁。对照组包括双抗血小板、抗凝、调脂等治疗，治疗组在对照组治疗的基础上+丹参多酚酸盐注射液200 mg/d静滴。急性ST段抬高型心肌梗死的诊断符合2010年中华医学会急性ST段抬高型心肌梗死诊断及治疗指南。本次研究经医院医学伦理委员会审核通过，入选研究对象均在知情同意下签署知情同意书。 1.2 研究方法
1.2.1 急诊PCI术 所有患者入院立即行急诊PCI术，时间窗均在6 h内，由经验丰富介入医师进行操作。
1.2.2 MDA测定 所有研究对象均于入院即刻及治疗后2周抽取肘静脉血各2 mL，分离血清用于MDA测定。采用双抗体夹心ABC-ELISA法。通过绘制标准曲线求出标本中MDA浓度。由上海西唐生物工程研究所提供试剂盒，按照说明书测定。
1.2.3 NADPH氧化酶p22phox活性测定 入院即刻及治疗后2周取肘静脉血各2 mL，采用明胶自然沉淀法联合红细胞裂解液法提取外周血吞噬细胞；硫氰酸胍一步法提取吞噬细胞总RNA；NADPH氧化酶p22phox（317bp）及GAPDH内参基因（572bp）的引物序列由上海生物工程技术服务有限公司提供。其中p22phox：上游 5’-TGGGCGGC TGCTTGATGGT-3’；下游5’-TGGGCGGCTGCTTGATGGT-3’；GAPDH mRNA：上游 5’-TCACCATCTTCCAGGAGCG-3’；下游 5’-CTGCTTCACCACCTTCTTGA-3’。PCR扩增体系采用50 μL反应体系。凝胶成像仪成像并保存结果。通过目的基因p22phox mRNA表达条带与内参条带的灰度比值比代表吞噬细NADPH氧化酶p22phox的表达水平。
1.3 统计学处理 所得数据使用SPSS 16.0软件包进行统计分析，符合正态分布的计量资料以（x±s）表示，符合正态分布且方差齐性两组间比较及两独立样本比较采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组治疗前后MDA水平的变化 治疗组治疗前后MDA水平分别为（2562.28±920.17）nmol/mL、
（1867.72±836.20）nmol/mL，对照组分别为（2448.41±872.81）nmol/mL、（2352.79±870.01）nmol/mL，
治疗组治疗后MDA水平较治疗前明显下降，比较差异有统计学意义（P<0.05），治疗组治疗后MDA水平较对照组治疗后明显下降，比较差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2 治疗组及对照组治疗前后p22phox活性的变化 治疗组治疗后NADPH氧化酶p22phox表达（0.61±0.30）较治疗前（0.98±0.45）明显下降，比较差异有统计学意义（P<0.05）（图1）。对照组治疗后NADPH氧化酶p22phox（0.88±0.32）与入院时（0.96±0.42）比较，差异无统计学意义。治疗组治疗后2周NADPH氧化酶p22phox活性较对照组治疗后明显降低，比较差异有统计学意义（P<0.05）（图2）。
3 讨论
良好的心肌再灌注是行PCI术的最终目标，也是改善患者预后的关键环节。目前研究表明，影响心肌再灌注的机制复杂，不能用单一的机制来防范和解决，而采用药物预防和治疗是研究的主要方向。氧化应激是近年来提出的影响PCI术后慢血流或无复流现象发生的重要机制之一[2-3]，近来动物实验研究发现丹参多酚酸盐预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有较好的防护作用[4]，可对抗心肌细胞凋亡的发生[5]，减少自由基的生成及增加对自由基的清除，再灌注损伤减轻，从侧面提示氧化应激对再灌注的影响[6]。NADPH氧化酶，是机体产生活性氧族的主要来源[7-8]，是参与氧化应激的主要的酶系，该途径促进大鼠心肌缺血再灌注氧化损伤[9]。MDA是脂质过氧化反应的产物之一，脂质过氧化在氧化应激研究中最为广泛，其水平高低常常可反映脂质过氧化的程度，间接地反映出机体细胞受自由基攻击的严重程度和细胞损伤的程度，是评价心肌缺血损伤的较好指标[10]。
本研究中，治疗组经治疗后NADPH氧化酶p22phox活性较治疗前明显降低，MDA水平下降，提示急性ST段抬高型心肌梗死患者经治疗后体内氧化应激水平下降，脂质过氧化水平降低，与张学军等[11]研究结论一致。而丹参多酚酸盐治疗组较对照组NADPH氧化酶p22phox活性及MDA水平下降更加明显，提示在常规治疗的基础上，加用丹参多酚酸盐可进一步抑制氧化应激的水平。丹参多酚酸盐可明显减弱NADPH氧化酶p22phox活性及降低MDA水平，在抑制氧化应激方面发挥重要作用，与相关研究结果一致[12]。对照组二者均有降低趋势，但差别无统计学意义，可能与PCI本身及时进行血运重建，且进行了规范的抗血小板、抗凝、调脂等治疗有关。且在丹参多酚酸盐的整个治疗过程中，无不良反应发生，提示丹参多酚酸盐临床用安全、有效。
中药丹参的成分可分为水溶性和脂溶性，而水溶性成分主要为酚类物质，对心血管疾病有益。而丹参多酚酸盐是酚类物质的高度纯化，其可降低急性ST段抬高型心肌梗死PCI术后氧化应激水平[13]，改善微循环，提高组织灌注，但潜含着多元化的药理作用机制[14]，其中之一可能与减弱吞噬细胞NADPH氧化酶p22phox的活性有关，但由于病例组发病机制本身较为复杂，氧化应激影响因素众多，尚需在以后的临床工作中进一步研究。
参考文献
[1]季俭，卢英民，姚能才，等.丹参多酚酸盐对冠状动脉慢血流的影响[J].临床心血管病杂志，2011，27（10）：751-752.
[2]范爱德.丹参川芎嗪注射液对PCI患者疗效及血清超敏C反应蛋白的影响[J].中国医学创新，2011，8（25）：3-5.
[3] Manabu K， Toshio I， Yuichi O.Differential exession of Toll-like receptor 4 and human monocyte subsets in acute myocardial infarctionpr[J].Atherosclerosis，2012，221（1）：249-253. [4]沈继龙，朱克军，李增男，等.丹参多酚酸盐预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的防护作用[J].临床心血管病杂志，2012，28（9）：707-710.
[5]周斌，赵芳，陈明，等.丹参多酚酸盐对高糖诱导的大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用[J].广东医学，2013，34（20）：3105-3108.
[6]张莹，黄国良.缬沙坦对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞氧化应激水平的影响[J].中国现代应用药学，2012，29（1）：11-15.
[7] Braunersreuther V， Jaquet V.Reactive oxygen species in myocardial reperfusion injury：from physiopathology to therapeutic approaches[J].Curr Pharm Biotechnol，2012，13（1）：97-114.
[8]孙彦，熊辉，宋俊，等.血清肿瘤标志物联合ROS、SOD、MDA、GSH-Px在消化道恶性肿瘤中的检测意义分析[J].中国医学创新，2012，9（16）：7-9.
[9]罗秀菊，吉少葵，刘斌，等.还原型辅酶Ⅱ氧化酶/血管过氧化酶途径促大鼠心肌缺血再灌注氧化损伤[J].中华心血管病杂志，2012，40（12）：991-996.
[10]李辉.丹参多酚酸盐对大鼠缺血再灌注损伤心脏、大脑组织中SOD、MDA的影响[J].中国实用神经疾病杂志，2012，15（17）：33-35.
[11]张学军，高鹏，闫吉霞，等.替罗非班对ST段抬高急性心肌梗死患者急诊PCI的疗效观察[J].中国医学创新，2011，8（23）：19-20.
[12]刘洋，邓兵，许嘉鸿，等.丹参多酚酸盐对急性心肌梗死患者介入治疗术后心肌组织灌注影响的临床研究[J].中国综合临床，2012，26（2）：121-126.
[13]叶名，艾辉，曾玉杰.丹参多酚酸盐对急性心肌梗死PCI术后患者血管内皮和血小板活化功能的影响[J].安徽医药，2014，（11）：2178-2181.
[14]吴燕燕，孙煜，王易，等.丹参多酚酸盐活血化瘀作用的多元化药理作用[J].中国现代应用药学，2010，27（11）：975-978.
（收稿日期：2014-09-28） （本文编辑：王宇）