【摘 要】
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目的:探究hsa_circ_0000520促进乳腺癌发生和转移的作用机制。方法:双荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验验证miR-556-5p与hsa_circ_0000520、溶质载体家族38成员2(SLC38A2)的靶向关系。MCF7细胞分为sh-NC组、sh-hsa_circ_0000520组、sh-hsa_circ_0000520+anti-NC组、sh-hsa_circ_
【基金项目】
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河南省医学科技攻关计划(联合共建)项目(编号:LHGJ20191074,201303219);
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目的:探究hsa_circ_0000520促进乳腺癌发生和转移的作用机制。方法:双荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验验证miR-556-5p与hsa_circ_0000520、溶质载体家族38成员2(SLC38A2)的靶向关系。MCF7细胞分为sh-NC组、sh-hsa_circ_0000520组、sh-hsa_circ_0000520+anti-NC组、sh-hsa_circ_0000520+anti-miR-556-5p组,qRT-PCR或Western blot检测细胞中hsa_circ_0000520、miR-556-5p、SLC38A2表达水平;MTT检测、平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;划痕愈合实验、Transwell实验评估细胞迁移、侵袭能力。通过裸鼠成瘤实验评估hsa_circ_0000520对miR-556-5p/SLC38A2的调控作用及对移植瘤生长的影响。结果:经验证,MCF7细胞中miR-556-5p与hsa_circ_0000520、SLC38A2均存在靶向关系。与sh-NC组比较,sh-hsa_circ_0000520组可降低MCF7细胞中hsa_circ_0000520、SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数目、划痕愈合率及迁移、侵袭细胞数(P<0.05),升高miR-556-5p表达水平(P<0.05);与sh-hsa_circ_0000520+anti-NC组比较,sh-hsa_circ_0000520+anti-miR-556-5p组可降低MCF7细胞中miR-556-5p表达水平(P<0.05),升高SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数目、划痕愈合率及迁移、侵袭细胞数(P<0.05),而对hsa_circ_0000520表达无显著影响(P> 0.05)。裸鼠成瘤实验结果表明,敲低移植瘤中hsa_circ_0000520的表达可升高miR-556-5p表达水平并降低SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平,同时降低肿瘤体积和肿瘤重量(P<0.05)。结论:hsa_circ_0000520可能通过靶向调控miR-556-5p/SLC38A2促进乳腺癌的发生和转移。
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