【摘 要】
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试验旨在获得高活性的猪α干扰素(porcine interferon alpha,PoIFN-α).利用融合PCR方法将天然猪α干扰素基因进行定点突变,突变位点为58H(CAT)→Y(TAC)、59E(GAG)→N(AAC)及
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;安阳工学院,河南安阳455000;河南省动物性食品安全重点实验室,河南郑州450002
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试验旨在获得高活性的猪α干扰素(porcine interferon alpha,PoIFN-α).利用融合PCR方法将天然猪α干扰素基因进行定点突变,突变位点为58H(CAT)→Y(TAC)、59E(GAG)→N(AAC)及61L(CTC)→S(AGC).将突变基因克隆到pET-32a载体上,转化至大肠杆菌Rosetta中诱导表达和鉴定,利用MTT法检测猪α干扰素对Vero细胞的抗增殖能力,利用Vero/VSV系统上测定其抗病毒活性.结果显示,重组蛋白表达形式为包涵体,蛋白分子质量约33 kDa,纯化后猪α干扰素YNS突变体蛋白的CC50为462.7 μg/mL,其抗病毒活性为1.63×106IU/mg,相比天然干扰素蛋白活性提高.本研究成功构建了高效猪α干扰素YNS突变体,为干扰素的临床应用提供理论基础.
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