【摘要】目的为提高实验室检验人员对疟原虫血片染色水平，规范疟疾血片制作，提高疟原虫检出率。方法利用反面冲洗技术制作血片。结果通过反面冲洗技术制作血片，使血片上的血细胞及疟原虫很好的保留血片上面，提高疟原虫检出率。结论可以使血膜上的细胞较好的存留在玻片上，减少了血膜易脱落等现象。使实验室检验人员的检测水平有了很大的提高。
　　【关键词】疟原虫；血片；反面冲洗
　　749文章编号：1004-7484（2014）-06-3596-01
　　疟疾是世界六大热带病和我国五大寄生虫病之一，主要分布于热带亚热带地区，世界上有40%的人口生活在疟疾流行区，目前每年有3-5亿人感染，死亡人数达100-300万人，对人类造成极大的危害。解放以来，我国大力开展疟疾防治工作，特别是开展消除疟疾工作以来，疟疾总体发病率逐渐下降，很多地区多年来无本地病例发生。但近年来随着国际间交流和劳务合作日趋频繁，外出务工者增多，特别是去非洲南部地区的劳务人员较多，当地感染流行疟疾现象时有发生，而目前大多检验人员对该病缺乏认识，镜检技术生疏，阅片能力不足，特别是在血片制作、染色等环节存在诸多问题，如厚血模容易脱落，薄血模分布不合理等等。本研究利用反面冲洗技术，减少对血膜的冲击力，使血膜上的细胞较好存留上面，提高了疟原虫检出率。现将本人多年工作实际经验及染色冲洗的一些技巧总结如下，供大家参考。
　　1取血
　　采血部位为耳垂或无名指，通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒去学部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量約一粒大米（即火柴头）大小，薄血膜约有厚血膜所需血量一半大小。
　　2推片
　　涂制厚、薄血膜的位置：通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上，将玻片分三等份：中部做厚涂片，右部备贴标签及编号用，薄血膜涂在左部。取血一小滴约4-5立方毫米滴于玻片中部，用清洁玻片的一角由血滴中央向周围旋转涂成直径为0.8-1.0厘米园形厚血膜。合适的厚度为；通过涂片能够看到钟表的指针而看不清数字。用一张边缘光滑的推片沾取如小米粒大的血滴约1.5-2.0立方毫米，在玻片左3分之1处，迅速将推片下缘平抵玻片，让血液沿着推玻片边缘散开，当血液向二侧扩展至2厘米宽时，使二片保持25-30度角从右向左迅速推成薄血膜。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。外观看血膜末端呈舌状、厚薄均匀。
　　3染色
　　先用腊笔在厚、薄血膜间划一界线，用甲醇固定薄血膜，在厚血膜上滴加2-3滴蒸馏水溶脱血红蛋白经过3分钟后，玻片保持静止不动，便于疟原虫沉着。取瑞氏-姬姆萨染色液A液2滴于薄血膜上，约1分钟左右后再将瑞氏-姬姆萨染色液B液滴加于A液上面4-5滴，用洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状使两液充分混合，混合后引到厚血膜上，使厚、薄血膜同时染色5至10分钟。
　　4冲洗
　　冲洗很关键，先用缓冲水轻轻洗去染料，不要先倒掉染料然后才清洗，因为这样将有染料的沉渣留在涂片上。然后将涂片正面朝下用水流冲洗反面这样冲洗厚血膜就不能脱落了。由于水流不直接冲洗血膜表面受液体的表面张力的影响只能把体积较小染料杂质冲洗下去而血片上的细胞留在上面。
　　5注意事项
　　5.1玻片在使用前应清洗新玻片应浸于有液态洗涤剂的清水中浸泡10-20分钟，然后用干净棉巾逐个擦试，再以清水冲洗3-4次，晾干最后用干净柔软的棉巾擦干备用。
　　5.2染液量需充足勿使染液蒸发干燥以防染料沉着于玻片上。
　　5.3溶脱血红蛋白时要自然干燥再进行滴加蒸馏水，冲洗时水流不能太大，时间不能太长，10秒钟左右即可。
　　5.4染色时当天气寒冷或湿度较大时，应于37度温箱中保温促干，以免细胞变形影响血片检查质量。
　　参考文献
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