【摘 要】
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目的:建立一种检测小鼠NKT细胞的方法。方法:首先将α-GalCer负载于空的CD1d四聚体上。将α-GalCer溶于1000mL/L的DMSO中,配成浓度为0.1g/L,之后震荡α-GalCer液,37℃,12h,用
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目的:建立一种检测小鼠NKT细胞的方法。方法:首先将α-GalCer负载于空的CD1d四聚体上。将α-GalCer溶于1000mL/L的DMSO中,配成浓度为0.1g/L,之后震荡α-GalCer液,37℃,12h,用之前超声水浴37℃,10min,取12mol/L的上述α-GalCer液加入到1mol/L的四聚体溶液中,将上述二者的混合液37℃,避光,孵育24～48h。然后应用流式细胞术(FCM)检测正常的和腹腔注射α-GalCer5μg3d后的小鼠的脾脏及骨髓中共表达α-GalCer/CD1d四聚体及CD3的NKT细胞。结果:在正常小鼠脾脏及骨髓的淋巴细胞中NKT细胞的比例分别为1.2%和1.6%;腹腔注射α-GalCer5μg3d后小鼠脾脏的淋巴细胞中NKT细胞有轻度的增加,比例为2%和2.7%。结论:CD1d四聚体是检测小鼠NKT细胞的有效工具。
Objective: To establish a method for detecting mouse NKT cells. Methods: α-GalCer was first loaded onto empty CD1d tetramers. Α-GalCer dissolved in 1000mL / L of DMSO, dubbed the concentration of 0.1g / L, followed by shaking α-GalCer solution, 37 ℃, 12h, before using the ultrasonic bath at 37 ℃, 10min, take 12mol / L of the above α -GalCer solution was added to 1mol / L tetramer solution, the mixture of the two at 37 ℃, dark, incubated for 24 ~ 48h. Flow cytometry (FCM) was used to detect NKT cells co-expressing α-GalCer / CD1d tetramers and CD3 in the spleen and bone marrow of normal and intraperitoneal mice injected with α-GalCer5μg3d. Results: The percentage of NKT cells in spleen and bone marrow of normal mice were 1.2% and 1.6%, respectively. After intraperitoneal injection of α-GalCer 5μg3d, the number of NKT cells in spleen of mice increased slightly with a ratio of 2% And 2.7%. Conclusion: CD1d tetramer is an effective tool to detect mouse NKT cells.
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