【摘 要】
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目的建立基于焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)的肾移植受体CYP3A5*3基因多态性的简单、快速、准确、高通量的检测方法。方法提取221例肾移植受体和200例健康人外周血基因组DN
【机 构】
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中南大学湘雅三医院(卫生部移植医学工程技术研究中心); 中南大学临床药理研究所;
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目的建立基于焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)的肾移植受体CYP3A5*3基因多态性的简单、快速、准确、高通量的检测方法。方法提取221例肾移植受体和200例健康人外周血基因组DNA,应用Pyro-MarkID焦磷酸测序仪进行焦磷酸测序,采用Sanger法DNA测序作为标准对照,观察分析焦磷酸测序法的可靠性,并分析肾移植受体人群CYP3A5*3多态性的分布。结果建立了基于焦磷酸测序技术的CYP3A5*3基因多态性检测新方法,实现了DNA标本的快速、可靠、高通量检测,经重复性检测和Sanger标准法DNA测序可靠性检测,用焦磷酸测序技术检测CYP3A5*3多态性的突变检出率及重复率均达100%。221例肾移植受体CYP3A5*3基因型分布:*1/*1型为23例(10.4%),*1/*3型为89例(40.3%),*3/*3型为109例(49.3%),与正常人群比较等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论与传统的测序方法相比,焦磷酸测序法能够简单、快速、准确地测定肾移植受体CYP3A5*3基因型,适合临床推广应用。
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