【摘 要】
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目的 优化重组人生长激素（recombinant human growth hormone,rhGH）-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱（size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC）检测方法 ,并对优化的方法 进行验证。方法 利用SEC-HPLC法对rhGH-Fc免疫融合蛋
【基金项目】
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吉林省重点科技攻关项目（20160204034YY）；
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目的 优化重组人生长激素（recombinant human growth hormone,rhGH）-Fc免疫融合蛋白多聚体含量尺寸排阻高效液相色谱（size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC）检测方法 ,并对优化的方法 进行验证。方法 利用SEC-HPLC法对rhGH-Fc免疫融合蛋白中多聚体含量进行检测,优化检测条件（盐浓度、流动相pH、流速、柱温及色谱柱型号）,观察目的 蛋白与聚合体分离的效果。对方法 的系统适应性、专属性、线性与范围、精密性、准确性及定量限进行验证。结果 优化后的方法 为采用TSK-gel G2000SWxl色谱柱（5μm,7.8 mm×300 mm）进行测定,流动相50 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.80）,检测波长280 nm,进样量100μL,流速0.6 mL/min,柱温45℃。rhGH-Fc免疫融合蛋白与聚合物分离度、理论塔板数、拖尾因子均能满足要求;rhGH-Fc免疫融合蛋白样品与对照品出峰时间一致,GH国家标准品与对照品出峰时间不同,蛋白缓冲液不出峰;rhGH-Fc免疫融合蛋白浓度在0.307～1.842 mg/mL范围内,其峰面积与上样量呈良好的线性关系（R~2=0.999 4）;重复性验证峰面积和纯度的RSD分别为0.7%和0.1%;中间精密性验证的RSD为0.8%;准确性验证的平均回收率为99.1%,RSD为1.9%;定量限为6μg/mL。结论 采用优化后的SEC-HPLC法检测rhGH-Fc免疫融合蛋白多聚体含量,准确性有所提高,柱效与分离度符合《中国药典》四部（2020版）的相关规定,可用于对样品中高分子含量的检测。
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