论文部分内容阅读
本文系黑龙江省教育厅高职高专2011年度科学技术研究（指导）项目《面粉中过氧化苯甲酰检测方法的研究》（课题编号：12515164）的阶段性研究成果。
【文章摘要】
酸性条件下，过氧化苯甲酰把Fe2+氧化成Fe3+，再与邻菲罗啉发生显色反应，建立了紫外分光光度法测定面粉中过氧化苯甲酰的方法。
【关键词】
面粉；过氧化苯甲酰；紫外分光光度法
过氧化苯甲酰（简称BPO）曾用作小麦面粉的改良剂和增白剂，对面粉有显著的增白和防腐作用。但是BPO的强氧化作用可与面粉中水分反应，生成苯甲酸和游离氧。游离氧能够使面粉中类胡萝卜素结构的共轭双键断裂而褪色漂白，而苯甲酸具有一定的毒性，有害人体健康。本文提出了紫外分光光度法测定面粉中过氧化苯甲酰的方法，方法简单，操作简便，容易推广，可用于面粉中过氧化苯甲酰的快速测定。
1 实验原理
用无水乙醇将待测面粉中的过氧化苯甲酰提取出来后，在酸条件下加热，可将Fe2+氧化成Fe3+，Fe3+与邻菲罗啉发生显色色反应，显色反应的程度与过氧化苯甲酰含量在一定范围内呈线性关系。
2 仪器与试剂
2.1仪器
UV762型双光束紫外可见分光光度计、TGL16M高速离心机、SG250HE超声波清洗器、万分之一电子天平、恒温水浴锅、比色管等。
2.2试剂
小麦面粉样品（市售）：牡丹江。无水乙醇、BPO标准溶液（1.0mg/mL、0.1mg/mL）、0.001mol/L硫酸亚铁铵、0.003mol/L邻菲罗啉、HAc-NaAc缓冲溶液（pH4～5）。
3 分析步骤
3.1绘制标准曲線
准确吸取0.1mg/mL BPO标准溶液0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80mL，1.0mg/mL BPO标准溶液0.10、0.20、0.40 mL于25mL比色管中，依次向比色管中1.0mL 0.001mol/L硫酸亚铁铵溶液、2.5mL HAc-NaAc缓冲溶液，混匀后置于60℃水浴中加热5min，冷却至室温，加入1mL 0.003mol/L邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容至刻度，静置20min，于波长510nm处，用1cm比色皿测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制标准曲线。
3.2 样品处理
准确称取小麦面粉样品2.000g于25mL比色管中，加10mL无水乙醇，超声10min，静置10min，取上清液以转速4000r/min离心30min，准确吸取上清液测吸光度。按标准工作曲线的步骤操作，测定其吸光度，然后在标准曲线范围内计算面粉中过氧化苯甲酰的含量。
4 结果与讨论
4.1反应溶剂的选择
BPO微溶于水，易溶于乙醚、丙酮，微溶于乙醇。乙醚、丙酮挥发性强且有毒。乙醇的极性大，脂溶性较差，它不仅能溶解BPO，也不会引入脂溶性杂质。而且乙醇无毒，对操作者和环境都不会造成不良影响和危害。因此，选择无水乙醇做溶剂。
4.2酸性条件的选择
取0.4mL 0.1mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液于3个25mL比色管中，依次加入1.0mL 0.001mol/L酸亚铁铵溶液，第一支管中加HAc-NaAc缓冲液，第二支管中加强酸（HCl）（1：1），第三支管中不加酸，水浴加热，取出冷却至室温后，加入邻菲罗啉，观察其颜色变化，结果表明，加HAc-NaAc缓冲液显色效果好，因此本试验选择HAc-NaAc缓冲液。
4.3测定波长的选择
取1.0mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液置于比色皿中，按标准曲线绘制的方法测定其吸光度值。（图1）
由图表可看出，1.0mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液在波长510nm处的吸光度值为最大，因此选择510nm为测定波长。
4.4反应温度的选择
取过氧化苯甲酰标准溶液（1.0mg/mL）0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL于比色皿中，对不同反应温度进行试验，探讨不同的反应温度对吸光度的影响。实验结果表明，60℃水浴时线性关系好，故选择60℃水浴加热。
4.5水浴中反应时间的选择
吸取0.3mL过氧化苯甲酰标液（1.0mg/mL）分别置于7个25mL比色管中，依次加入1.0mL 0.001mol/L的硫酸亚铁铵溶液和2.5mL HAc-NaAc缓冲液，混匀，置60℃水浴中反应，反应时间分别为1min 、3min、6min、10min、20min、40min、60min。取出静置至室温后分别加入1.0mL 0.003moL/L的邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容至刻度，混匀后静置，用1cm的石英比色皿在510nm处测定其吸光度。（表1）
由表1可见：反应时间为6min时吸光度值最大，因此试验选择6min为水浴加热反应时间。
4.6静置时间的选择
吸取0.3mL过氧化苯甲酰标液（1.0mg/mL）分别于7个25mL的比色管中，然后依次各加入1.0mL 0.001moL/L的硫酸亚铁铵溶液和2.5mL HAc-NaAc缓冲液，置60℃水浴中反应6min后取出，冷却至室温，依次加入1.0mL 0.003mol/L邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容，混匀后分别静置5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min，测吸光度。（图 2）
由图2可知，静置20 min时吸光度最大。
4.7样品分析
准确吸取0.45mL样品液，加入1.0mL 0.001moL/L的硫酸亚铁铵溶液，2.5mL HAc-NaAc缓冲液， 60℃水浴反应6min，冷却至室温，加入1.0mL 0.003mol/L的邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容至刻度，混匀静置20min，用lcm的石英比色皿测定吸光度（表2）。
【参考文献】
[1]侯彩云，石文贞，王启辉.小麦粉中过氧化苯甲酰含量定性检测方法的研究[J].粮油食品科技，2008，16（1）
[2]任海林，胡忠平.面粉中过氧化苯甲酰测定方法初探[J].中国公共卫生，2003，19（2）
【作者信息】
崔杨，1979.01，硕士，讲师，黑龙江林业职业技术学院。
【文章摘要】
酸性条件下，过氧化苯甲酰把Fe2+氧化成Fe3+，再与邻菲罗啉发生显色反应，建立了紫外分光光度法测定面粉中过氧化苯甲酰的方法。
【关键词】
面粉；过氧化苯甲酰；紫外分光光度法
过氧化苯甲酰（简称BPO）曾用作小麦面粉的改良剂和增白剂，对面粉有显著的增白和防腐作用。但是BPO的强氧化作用可与面粉中水分反应，生成苯甲酸和游离氧。游离氧能够使面粉中类胡萝卜素结构的共轭双键断裂而褪色漂白，而苯甲酸具有一定的毒性，有害人体健康。本文提出了紫外分光光度法测定面粉中过氧化苯甲酰的方法，方法简单，操作简便，容易推广，可用于面粉中过氧化苯甲酰的快速测定。
1 实验原理
用无水乙醇将待测面粉中的过氧化苯甲酰提取出来后，在酸条件下加热，可将Fe2+氧化成Fe3+，Fe3+与邻菲罗啉发生显色色反应，显色反应的程度与过氧化苯甲酰含量在一定范围内呈线性关系。
2 仪器与试剂
2.1仪器
UV762型双光束紫外可见分光光度计、TGL16M高速离心机、SG250HE超声波清洗器、万分之一电子天平、恒温水浴锅、比色管等。
2.2试剂
小麦面粉样品（市售）：牡丹江。无水乙醇、BPO标准溶液（1.0mg/mL、0.1mg/mL）、0.001mol/L硫酸亚铁铵、0.003mol/L邻菲罗啉、HAc-NaAc缓冲溶液（pH4～5）。
3 分析步骤
3.1绘制标准曲線
准确吸取0.1mg/mL BPO标准溶液0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80mL，1.0mg/mL BPO标准溶液0.10、0.20、0.40 mL于25mL比色管中，依次向比色管中1.0mL 0.001mol/L硫酸亚铁铵溶液、2.5mL HAc-NaAc缓冲溶液，混匀后置于60℃水浴中加热5min，冷却至室温，加入1mL 0.003mol/L邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容至刻度，静置20min，于波长510nm处，用1cm比色皿测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制标准曲线。
3.2 样品处理
准确称取小麦面粉样品2.000g于25mL比色管中，加10mL无水乙醇，超声10min，静置10min，取上清液以转速4000r/min离心30min，准确吸取上清液测吸光度。按标准工作曲线的步骤操作，测定其吸光度，然后在标准曲线范围内计算面粉中过氧化苯甲酰的含量。
4 结果与讨论
4.1反应溶剂的选择
BPO微溶于水，易溶于乙醚、丙酮，微溶于乙醇。乙醚、丙酮挥发性强且有毒。乙醇的极性大，脂溶性较差，它不仅能溶解BPO，也不会引入脂溶性杂质。而且乙醇无毒，对操作者和环境都不会造成不良影响和危害。因此，选择无水乙醇做溶剂。
4.2酸性条件的选择
取0.4mL 0.1mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液于3个25mL比色管中，依次加入1.0mL 0.001mol/L酸亚铁铵溶液，第一支管中加HAc-NaAc缓冲液，第二支管中加强酸（HCl）（1：1），第三支管中不加酸，水浴加热，取出冷却至室温后，加入邻菲罗啉，观察其颜色变化，结果表明，加HAc-NaAc缓冲液显色效果好，因此本试验选择HAc-NaAc缓冲液。
4.3测定波长的选择
取1.0mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液置于比色皿中，按标准曲线绘制的方法测定其吸光度值。（图1）
由图表可看出，1.0mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液在波长510nm处的吸光度值为最大，因此选择510nm为测定波长。
4.4反应温度的选择
取过氧化苯甲酰标准溶液（1.0mg/mL）0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL于比色皿中，对不同反应温度进行试验，探讨不同的反应温度对吸光度的影响。实验结果表明，60℃水浴时线性关系好，故选择60℃水浴加热。
4.5水浴中反应时间的选择
吸取0.3mL过氧化苯甲酰标液（1.0mg/mL）分别置于7个25mL比色管中，依次加入1.0mL 0.001mol/L的硫酸亚铁铵溶液和2.5mL HAc-NaAc缓冲液，混匀，置60℃水浴中反应，反应时间分别为1min 、3min、6min、10min、20min、40min、60min。取出静置至室温后分别加入1.0mL 0.003moL/L的邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容至刻度，混匀后静置，用1cm的石英比色皿在510nm处测定其吸光度。（表1）
由表1可见：反应时间为6min时吸光度值最大，因此试验选择6min为水浴加热反应时间。
4.6静置时间的选择
吸取0.3mL过氧化苯甲酰标液（1.0mg/mL）分别于7个25mL的比色管中，然后依次各加入1.0mL 0.001moL/L的硫酸亚铁铵溶液和2.5mL HAc-NaAc缓冲液，置60℃水浴中反应6min后取出，冷却至室温，依次加入1.0mL 0.003mol/L邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容，混匀后分别静置5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min，测吸光度。（图 2）
由图2可知，静置20 min时吸光度最大。
4.7样品分析
准确吸取0.45mL样品液，加入1.0mL 0.001moL/L的硫酸亚铁铵溶液，2.5mL HAc-NaAc缓冲液， 60℃水浴反应6min，冷却至室温，加入1.0mL 0.003mol/L的邻菲罗啉溶液，用蒸馏水定容至刻度，混匀静置20min，用lcm的石英比色皿测定吸光度（表2）。
【参考文献】
[1]侯彩云，石文贞，王启辉.小麦粉中过氧化苯甲酰含量定性检测方法的研究[J].粮油食品科技，2008，16（1）
[2]任海林，胡忠平.面粉中过氧化苯甲酰测定方法初探[J].中国公共卫生，2003，19（2）
【作者信息】
崔杨，1979.01，硕士，讲师，黑龙江林业职业技术学院。