【摘 要】
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目的 观察转化生长因子(TGF)-β1对骨髓干细胞向软骨细胞分化过程中Wnt信号通路相关基因表达的影响.方法 TGF-β1软骨诱导液培养骨髓干细胞(BMSCs),倒置相差显微镜进行形态学观察,甲苯胺蓝染色、鉴定.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测不同浓度TGF-β1对糖胺聚糖(GAG)表达量的影响,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测目的基因Wnt1、Wnt3a、β-连环蛋白(β-cat
【机 构】
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目的 观察转化生长因子(TGF)-β1对骨髓干细胞向软骨细胞分化过程中Wnt信号通路相关基因表达的影响.方法 TGF-β1软骨诱导液培养骨髓干细胞(BMSCs),倒置相差显微镜进行形态学观察,甲苯胺蓝染色、鉴定.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测不同浓度TGF-β1对糖胺聚糖(GAG)表达量的影响,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测目的基因Wnt1、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、Sox9和胶原蛋白Ⅱ(Collagen Ⅱ) mRNA表达.结果 TGF-β1诱导培养第21天,甲苯胺蓝染色显示,95％以上细胞为软骨细胞；2μg/L TGF-β1诱导液组细胞培养液中GAG表达量为(69.16±1.18) mg/L,明显高于其余各组(P＜0.05)；FQ-PCR结果表明,与对照组比较,2μg/LTGF-β1诱导液组的Wnt1、Wnt3a mRNA的表达量分别为0.0266±0.0047、0.0154±0.0033,其表达受到了抑制(P＜0.05),β-catenin mRNA的表达量为0.0187 ±0.0021,明显低于对照组(P＜0.01)；相反,Sox9、Collagen Ⅱ mRNA表达量分别为0.0682±0.0024、0.1134±0.0048,表达有所升高(P＜0.05).结论 TGF-β1促进BMSCs向软骨细胞分化,Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达受到抑制,而软骨细胞特异基因表达增加。
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