探讨大鼠肾缺血再灌注(IR)过程中流体剪切力(FSS)改变引起肾损伤的机制。
方法1．细胞实验：将人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)分为4组，(1)应用平板流体小室系统对HUVEC加载12 dyn/cm2的FSS 30、45、90 min；(2)将HUVEC加载FSS 2 h后停止加力，并分别培养1、3、8、12 h；(3)将0、1、2、4、8 mmol二甲双胍分别对HUVEC预处理培养24 h；(4)对照组为正常培养HUVEC。采用蛋白质印迹法检测各组细胞内p-AMPK/AMPK蛋白表达水平。2.体内实验：取成功建立IR模型的SD大鼠16只，采用随机数字表法分4组，每组4只：(1)低温静态保存(CS)组：将离体大鼠双肾冷保存4 h；(2)低温机械灌注保存(HMP)组：将离体大鼠双肾持续灌注0℃乳酸林格液4 h。(3)二甲双胍处理组(Met-CS组)：术前连续3 d腹腔注射二甲双胍，获取离体大鼠双肾后冷保存4 h；(4)对照组离体大鼠双肾热缺血30 min后不做任何处理。采用原位末端标记法、HE染色等观察各组大鼠肾组织损伤情况，采用免疫组织化学法检测肾组织内p-AMPK蛋白表达和分布规律。分析FSS缺失与肾组织AMPK表达间的相关性。
结果FSS可上调HUVEC内p-AMPK表达水平，并随作用时间延长表达升高；停力后，HUVEC内p-AMPK蛋白表达随时间延长逐渐降低(P<0.05)；二甲双胍可激活AMPK活性，并随浓度增加而升高(P<0.05)。HMP组肾组织内p-AMPK含量明显高于CS组(P<0.05)，HMP组肾组织内p-AMPK表达主要分布于肾小管处，少数于肾小球内皮细胞和血管处。HMP组肾组织细胞凋亡率明显低于CS组(P<0.05)。HMP组大鼠肾组织损伤轻，无水肿，肾小管轻度扩张；而CS组肾组织损伤严重，肾小管明显水肿。
结论大鼠肾IR过程中，FSS改变可能通过AMPK途径影响肾组织损伤。