【摘 要】
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目的 建立水产品中溶藻弧菌微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法.方法 采用SN/T 1870-2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中溶藻弧菌的引物
【机 构】
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北京海关,北京 100026;中国食品发酵工业研究院有限公司,北京 100015
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目的 建立水产品中溶藻弧菌微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法.方法 采用SN/T 1870-2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中溶藻弧菌的引物探针,建立优化ddPCR反应体系,梯度稀释溶藻弧菌纯培养液,确定ddPCR方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ);通过人工添加试验,比较ddPCR与实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法定量的准确性,以验证ddPCR方法用于检测水产品中溶藻弧菌的可行性.结果 所建立的水产品中溶藻弧菌ddPCR检测方法经过溶藻弧菌标准菌株、分离菌株以及其他近源菌株验证,具有良好的特异性;纯培养的LOD和LOQ一致,均为2.2拷贝/反应,相当于110 CFU/ml纯菌液,定值结果与传统平板计数方法相差0.04个对数值.在人工污染模拟试验中ddPCR的定量结果较qPCR更接近理论添加值,检测重复性以及对低浓度样品的检出情况也均优于qPCR.ddPCR对人工污染样品的LOQ可达120拷贝/g.结论 溶藻弧菌ddPCR定量检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可为快速定量检测溶藻弧菌提供参考.
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