多重连接探针扩增技术(MLPA)在病原微生物检测与疾病诊断中的应用

来源 :农业生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong514
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)是一种可以在单个反应中同时对50个靶基因进行定性和半定量分析的检测方法.其主要步骤包括靶序列DNA变性、探针和靶序列DNA杂交、连接酶连接探针、PCR扩增、毛细管电泳及数据分析.多重连接探针扩增技术已广泛应用于肿瘤的诊断与预后、遗传性疾病的基因检测、产前检测等领域.鉴于混合感染现象增加,敏感、特异和高通量检测方法是当前动物疾病检测中的急需,多重连接探针扩增技术在病原微生物的高通量检测领域显示出良好的应用前景.本文从多重连接探针扩增技术的原理和步骤、在病原微生物检测、肿瘤诊断和遗传性疾病诊断中的应用、优势和不足以及应用前景展望等方面进行综述,以期为MLPA技术在动物病原检测和疾病诊断中的应用和改良提供参考.
其他文献
前列腺素E合成酶(prostaglandin E synthase,PTGES)是生物合成前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)过程中的末端限速酶,前列腺素E可与其受体特异性结合,参与包括动物生殖在内的多种生理过程.为探索PTGES在高原特种经济动物牦牛(Bos grunniens)生殖系统中的表达,预测其潜在生殖功能,本研究以卵泡期、黄体期和妊娠期的牦牛子宫、卵巢及输卵管为实验材料,构建载体,克隆牦牛PTGES基因并进行生物信息学分析;利用qPCR方法检测牦牛PTGES基因在子宫、卵
乙烯响应因子(ethylene responsive factors,ERFs)属于APETALA2/乙烯响应因子(APETALA2/ethylene responsive factor,AP2/ERF)超家族,是植物中最大的转录因子家族之一.研究表明,ERFs参与植物的生长发育、信号转导、生物和非生物胁迫等多种生物学过程.为了研究马铃薯(Solanum tuberosum)StERF109基因(GenBank No.XM_006355301.2)的功能,本研究对其进行了生物信息学分析,构建了StERF1
目的:了解伊犁锡伯族成人头面部表型人类学特征.方法:采用《人体测量方法》,对伊犁地区588例锡伯族成人男女头面部18项测量指标、7项观察指标、6项指数指标进行调查研究.结果:随年龄增加,男性头面部表型变化范围以及变化幅度大于女性,头长、头宽、下颌角间宽、眼内角间宽、鼻宽、口宽、容貌面高、形态面高、鼻高、唇高、上唇皮肤部高、红唇厚度、容貌耳长、容貌耳宽、耳上头高、形态面指数具有性别差异;内眦褶、鼻梁侧面观、上唇皮肤高度、红唇厚度存在性别差异.结论:伊犁锡伯族成人头面特征表现为有内眦褶、直型鼻梁、水平鼻底、宽
生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)是由卵母细胞分泌的生长因子,参与调控哺乳动物的卵巢发育,但在禽类中的研究较少.为研究金定鸭(Anas platyrhynchos domestica)GDF9基因的SNPs,找出与产蛋性能相关的分子标记,本研究采用直接测序的方法,检测GDF9基因在458只金定鸭母鸭中的SNPs,并分析各个多态位点的不同基因型与金定鸭开产日龄和300日龄产蛋量的相关性.结果显示,金定鸭外显子1和外显子2上共发现10个突变位点,其中有6
肌苷酸(inosine monophosphate,IMP)作为肉质风味的重要物质基础,已经成为评价肉质鲜味和新鲜程度的重要指标.为探究静原鸡(Gallus gallus)和浦东鸡肌肉组织肌苷酸沉积过程中关键调控基因的作用,为品种间肌肉品质研究提供理论支持,本研究在测定静原鸡和浦东鸡肌苷酸、肌苷及部分物理指标的基础上,通过转录组测序筛选两个品种间与肉质相关的差异表达基因,采用qPCR方法检测与细胞周期蛋白A1相互作用的蛋白质(protein interacting with cyclin A1,PROCA
矮小鸡(Gallus domesticus)由于其体型小,节约养殖空间等优点常被用于鸡配套系生产.本研究为明确矮小体型芦花鸡的生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)基因突变类型,探究正常体型芦花鸡和矮小体型芦花鸡间的生长发育差异,针对矮小体型芦花鸡GHR基因常见的4种突变位点设计引物,以矮小体型芦花鸡的基因组DNA为模板进行PCR扩增,分析其遗传变异类型.同时比较分析了正常体型芦花鸡与矮小体型芦花鸡体重和胫长的发育特点,使用Logistic、Gompertz和Von Ber
微小核糖核酸(microRNA,miRNA)作为重要的基因调控元件,在多种哺乳动物皮肤及毛囊中均有表达,并在转录后水平调节皮肤和毛发的生长和发育过程.本研究旨在对西藏绒山羊(Capra hircus)皮肤组织miRNA进行分析与鉴定,探讨miRNA在绒毛纤维直径性状中可能发挥的作用及调控机制.分别选取细绒(平均纤维直径(12.04±0.03)μm)和粗绒(平均纤维直径(14.88±0.05)μm)的西藏绒山羊各4只,对肩胛部皮肤组织提取RNA建立文库进行高通量测序.对原始序列进行过滤,并与参考基因组(AR
Chemerin是由脂肪组织分泌的脂肪因子,可以调节脂肪细胞的代谢和免疫应答等生物学过程.本研究以鸡(Gallus gallus)肝脏组织总RNA为模板,采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法获得鸡的Chemerin基因全长cDNA序列,应用qPCR检测鸡Chemerin基因mRNA在不同组织中的表达情况;构建Chemerin-Myc真核融合表达载体并转染L
随着恒温扩增技术的快速发展,扩增产物的检测成为限制该技术快速推广和应用的关键.本文结合环介导恒温扩增技术(loop mediated isothermal amplification,LAMP)特点以及传统检测方法,探究了近几年发展起来的新型产物检测方法,如基于反应体系中副产物生成分析的方法、多重靶标检测为目标的方法,以及利用CRISPR/Cas等的序列特异性的可视化检测方法的原理和应用现状,解析了LAMP产物检测面临的机遇和挑战,旨在为核酸分析产业以及基于核酸扩增分析的应用提供支撑.
枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)菌株Z-5对多种植物病原真菌具有显著的拮抗效果.本研究通过对峙培养法检测菌株Z-5对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的拮抗作用,通过透明圈法检测无菌滤液蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶及嗜铁素活性,利用酸沉淀法提取抑菌物质并采用抑菌圈法检测提取物对尖孢镰刀菌的拮抗效果,利用高效液相色谱(HPLC)对提取物进行分离,通过抑菌圈法对分离的组分进行活性检测,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorp