沉默PARP-1对氢醌所致大鼠骨髓间充质干细胞凋亡影响

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目的探讨沉默聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)对氢醌所致大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)凋亡的影响。方法①PARP-1基因RNA干扰表达质粒转染BMMSCs后,经新霉素筛选获得PARP-1沉默BMMSCs,以免疫印迹法鉴定所构建的细胞。②以空载体BMMSCs为对照组,以PARP-1沉默BMMSCs为实验组。分别以质量浓度为0.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0和320.0μmol/L的氢醌(溶于磷酸盐缓冲液)作用于2组细胞24 h,以噻唑蓝法检测细胞活力,根据细胞活力检测结果选择后续实验氢醌染毒剂量。③以浓度为0.0~20.0μmol/L的氢醌作用于2组细胞24 h后,以流式细胞技术检测细胞凋亡情况,以实时荧光定量-聚合酶链反应检测PARP-1 mRNA表达情况。结果①用质量浓度为400 mg/L的新霉素成功筛选出PARP-1沉默BMMSCs和空载体BMMSCs,PARP-1沉默BMMSCs中PARP-1蛋白表达量较BMMSCs下降85.00%,成功建立PARP-1沉默细胞。②根据细胞活力检测结果,后续实验选择氢醌染毒剂量为0.0~20.0μmol/L。3与氢醌染毒剂量为0.0μmol/L时比较,对照组及实验组细胞早期凋亡率分别在氢醌染毒剂量为10.0和5.0μmol/L时即出现有统计学意义的升高(P<0.05);且在浓度为0.0~10.0μmol/L时,随着氢醌染毒剂量的增加,2组细胞早期凋亡率均增加(P<0.01),均呈剂量-效应关系。③与氢醌染毒剂量为0.0μmol/L比较,对照组和实验组细胞的PARP-1 mRNA相对表达水平均在氢醌染毒剂量为5.0μmol/L时即出现有统计学意义的升高(P<0.05),且在每个氢醌染毒剂量下实验组细胞PARP-1 mRNA相对表达水平均低于对照组(P<0.05);在浓度为0.0~20.0μmol/L时,随着氢醌染毒剂量的增加,2组细胞PARP-1 mRNA相对表达水平均增加(P<0.01),均呈剂量-效应关系。结论 PARP-1沉默BMMSCs在氢醌作用下更易发生凋亡,PARP-1可能参与了氢醌诱导的细胞凋亡。
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