【摘 要】
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目的 建立一种高效鸡胚视顶盖电转基因技术,对自制电极进行评估.方法 在鸡胚发育的第5天(E5),将0.5 g/L的pCAGGS-绿色荧光蛋白(GFP)质粒0.25 ～ 0.5μl准确地注射到视顶盖内,每
【机 构】
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新乡医学院生命科学技术学院,河南新乡453003;新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室,河南新乡453003;新乡医学院生命科学技术学院,河南新乡,453003;新乡医学院河南省医用组织再生重点实验
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目的 建立一种高效鸡胚视顶盖电转基因技术,对自制电极进行评估.方法 在鸡胚发育的第5天(E5),将0.5 g/L的pCAGGS-绿色荧光蛋白(GFP)质粒0.25 ～ 0.5μl准确地注射到视顶盖内,每组60个鸡胚,在电压18V、每次脉冲60ms、间隔100ms、电脉冲6次的条件下,以原装电极为对照,自制电极为实验组进行定时定位活体电转基因,电转后在E6～E12时观察胚胎成活率,取材后在体视荧光显微镜下观察报告基因GFP表达结果以此判断转染的效率.结果 在鸡胚模型中,通过自制电极转染鸡胚视顶盖,24h后鸡胚成活率达到89％,在鸡胚发育到E12时存活率达到35％,与原装电极相比分别提高48.3％和600％个百分点.结论 自制电极在鸡胚视顶盖电转过程对胚胎的损伤小,转染后胚胎成活率高,为鸡胚视顶盖电转基因提供一种高效的转染技术.
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