【摘 要】
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目的构建双顺反子表达载体DV,并检测其表达效率。方法以载体VR1012为模板,PCR扩增BGH基因和启动子CMV-intronA基因片段,分别连接至载体VR1012启动子和终止子之间的相应位点上
【机 构】
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吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室;
【基金项目】
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吉林大学2011年研究生创新研究计划项目(20111024)
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目的构建双顺反子表达载体DV,并检测其表达效率。方法以载体VR1012为模板,PCR扩增BGH基因和启动子CMV-intronA基因片段,分别连接至载体VR1012启动子和终止子之间的相应位点上,构建双顺反子表达载体DV。另以质粒pshuttle-luciferase为模板,PCR扩增报告基因luciferase片段,分别连接至DV的两个启动子后,得到质粒DV-luc1和DV-luc2。将质粒DV-luc1、DV-luc2和阳性质粒pshuttle-luciferase分别转染COS-7细胞,Western blot检测luciferase蛋白的表达情况,荧光酶标仪检测luciferase降解底物的水平。结果双顺反子表达载体DV经双酶切鉴定证明构建正确;转染重组质粒DV-luc1和DV-luc2的COS-7细胞中均有luciferase的表达,且表达效率DV-luc2略高于DV-luc1。结论 已成功构建了双顺反子表达载体DV,且载体的第2个启动子的启动效率略高于第1个启动子,为基因治疗、转录调控、多价疫苗等的研究奠定了基础。
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