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【摘 要】食品安全问题是关系国民健康的重大问题。食品微生物污染是涉及面最广、影响最大、问题最多的一类污染。确保食品微生物检测实验室检测数据有效性、公正性、可靠性的必要条件之一是使用经过确认的食品微生物检测方法。本文简述了目前国内外关于食品微生物检测方法的确认或证实的技术规范。
【关键词】食品;微生物检测;方法确认;方法证实
目前，食品微生物检测可选择的方法范围较广，既有国际标准、国际权威组织发布的标准，又有国家标准、行业标准等;针对各种快速检测技术以及仪器设备的开发及使用，实验室可以制定非标准方法，并经过确认后作为有效的检验方法使用。一个实验室在拟用某一食品微生物检验方法前，无论是标准方法还是非标准方法，皆应对其进行严格证实或确认，是分析操作中的一个必要的程序。
一、我国关于食品微生物检测方法确认的技术规范
在参考AOAC《食品和环境表面微生物检测方法确认指南（2011）》和ISO 16140：2003，结合我国食品微生物检测方法确认的实际，我国制定了SN＼T 3266-2012《食品微生物检测方法确认技术规范》，其中规范了食品微生物定性、定量检验方法确认中的术语和定义、技术方案，数据统计分析及方法的性能指标，以确保经确认后的微生物定性、定量检验方法的技术可靠性和权威性。【1】
二、ISO关于食品微生物检测方法的确认技术
与食品微生物检测方法确认与证实相关的ISO标准包括：
（一）、ISO 16140《食品和饲料微生物学可替代方法确认规范》
ISO 16140适用于食品、动物饲料、环境和兽药样品的可替代方法的确认，但不适用于作为单个实验室的可替代方法的实验室内部确认。【2】
（二）、ISO＼TC 34＼SC 9N 593《实验室内方法确认》
该标准详述了实验室内确认可分为如下情况：全面确认方法的应用，用于当实验室需要确认方法达到公布的性能指标时;应用全面确认方法于新的基质，用于实验室确证新的基质没有引入新的误差;使用新方法，特别是新的病原体;人员和仪器变动。【3】
（三）、ISO 13843《水质 微生物检测方法确认指南》
ISO 13843适用于选择性定量方法，可以是直接基于显微镜计数，或是间接基于生成的菌落或浊度。该范围内的工作原理和程序通常被称为检出＼未检出、最大可能数（MPN）、菌落计数和直接（显微）计数。【4】
三、AOAC关于食品微生物检测方法的确认
AOAC在检验方法的开发、验证、审定、规范化和标准化方面的开创性工作，得到了国内外的许多组织机构的承认和应用，是一个比较权威的致力于食品和农业领域的分析方法验证和认可的国际组织。检测方法需要得到AOAC的确认时，都必须按照一套完整和严密的评价程序。为适合不同客户的需求，AOAC制定了官方方法确认、同行验证和性能测试三种程序，对食品微生物学分析方法进行确认。
当需要最高可信度时，采用AOAC官方方法确认程序，由于AOAC官方方法经过了彻底和严格的测试，在全世界范围内具有权威性，常常为ISO、CAC、IDF所采用。
当需要较快的确认速度和较低的可信度时，采用AOAC同行验证程序，同行验证程序是通过一个简易的过程，为那些不适于采用完整协同研究进行验证的方法，提供了一个被AOAC认可的进入点。
当需要对试剂盒进行评价时，则采用AOAC研究所性能测试程序。
四、美国关于食品微生物检测方法的确认技术
（一）、美国环境保护局的方法确认。适用于EPA微生物檢测标准方法或标准方法改进后的确认，亦适用于有关测定环境微生物以及抗菌药物药敏试验的所有方法。典型的方法确认包括样品处理，提取或分离（微生物或核酸）程序，以及对待分析物的分析检测，包括一系列分析物的确认。
（二）、美国食品药品监督管理局的方法确认。适用于所有FDA在机构监管能力范围内开发和参与食品分析方法确认的实验室，包括所有的研究实验室和现场实验室。
（三）、美国农业部食品安全检验局的方法确认。是为了指导一些机构设计或研究食源性致病菌检测方法的确认，这些机构包括检测试剂盒制造商、实验室和独立验证机构。是肉、禽、蛋产品、环境样品的方法确认。该文件不适用微生物的计数方法。
五、新加坡关于食品微生物检测方法的确认技术
新加坡认可委员会--新加坡实验室认可方案（SAC-SINGLAS）于2002年7月发布了《微生物检测方法确认指导书》，主要涉及食品、水以及药品的微生物检测方法的确认，尤其是对传统意义上的定量方法的确认做出了指导。
涉及食品、水以及药品的微生物检测方法的确认，侧重于菌落总数、最大可能数（MPN）以及选择性培养基上的特定目标菌的计数等传统定量方法的确认。由于传统定量方法的检测原理是菌落计数或者是测定液体培养物的浊度，而现代快速检测方法则是依靠测量微生物活性产物的数量或变化来定量的，因此该方法不适用于现代快速检验方法的确认。【5】
微生物检测方法的确认可分为主要确认和次要确认。主要确认也称全面确认，是指通过提供客观证据对特定的预期用途或应用要求已得到满足的认定。次要确认也称验证，是指通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定。【6】
六、澳大利亚关于食品微生物检测方法的确认技术
AS＼NZS 4659《食品微生物检测方法等效评定指南》，本标准有澳大利亚和新西兰食品微生物学委员会FT＼4联合编写，其目的是为微生物测试方法等效性评定提供指导。内容主要为如何确定某一替代方法的检测结果与澳大利亚标准或澳大利亚＼新西兰联合标准方法一致，是最早对方法等效性验证进行规定的标准之一。
本标准由4个子标准组成：定性试验、定量试验、证实试验、抗生素检测。
一个替代方法若能给出澳大利亚或澳大利亚＼新西兰标准方法相同的结果，即可以被视为有效，但仅指对试验所用的基质有效。验证研究的应用重点在于使用的方法和试验基质，而非进行验证试验的实验室或人员，这意味着对某一特定基质的方法验证可通过验证报告而被另一个实验室采纳。【7】
总之，随着检测范围的扩展、检测要求的提高，实验室总是不断地扩展新的检测项目，新的检测领域，采用新的标准方法，有时候还需要采用实验室方法或非标准方法进行检测。实验室在采用某一检验方法前，无论是标准方法还是非标准方法，或者对标准方法进行偏离时，都应通过核查并提供客观证据，以证实这些方法或改变适合于预期用途。所以说方法验证和确认是非常重要的工作。
参考文献：
[1]SN＼T 3266-2012食品微生物检测方法确认技术规范[S].
[2]ISO 16140-2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs-Protocol for the validation of alternative methods[S].
[3]ISO＼TC 34＼SC 9N 593实验室内方法确认[S].
[4]ISO＼TR 13843 Water quality-Guidance on validation of microbiological methods[S].
[5]http：//www.sac-accreditation.org.sg/index.asp[OL].
[6]雷质文.食品微生物实验室质量管理手册[M].北京：中国标准出版社.
[7]AS-ZNS 4659 Guide to determining the equivalence of food microbiology test methods[S].
【关键词】食品;微生物检测;方法确认;方法证实
目前，食品微生物检测可选择的方法范围较广，既有国际标准、国际权威组织发布的标准，又有国家标准、行业标准等;针对各种快速检测技术以及仪器设备的开发及使用，实验室可以制定非标准方法，并经过确认后作为有效的检验方法使用。一个实验室在拟用某一食品微生物检验方法前，无论是标准方法还是非标准方法，皆应对其进行严格证实或确认，是分析操作中的一个必要的程序。
一、我国关于食品微生物检测方法确认的技术规范
在参考AOAC《食品和环境表面微生物检测方法确认指南（2011）》和ISO 16140：2003，结合我国食品微生物检测方法确认的实际，我国制定了SN＼T 3266-2012《食品微生物检测方法确认技术规范》，其中规范了食品微生物定性、定量检验方法确认中的术语和定义、技术方案，数据统计分析及方法的性能指标，以确保经确认后的微生物定性、定量检验方法的技术可靠性和权威性。【1】
二、ISO关于食品微生物检测方法的确认技术
与食品微生物检测方法确认与证实相关的ISO标准包括：
（一）、ISO 16140《食品和饲料微生物学可替代方法确认规范》
ISO 16140适用于食品、动物饲料、环境和兽药样品的可替代方法的确认，但不适用于作为单个实验室的可替代方法的实验室内部确认。【2】
（二）、ISO＼TC 34＼SC 9N 593《实验室内方法确认》
该标准详述了实验室内确认可分为如下情况：全面确认方法的应用，用于当实验室需要确认方法达到公布的性能指标时;应用全面确认方法于新的基质，用于实验室确证新的基质没有引入新的误差;使用新方法，特别是新的病原体;人员和仪器变动。【3】
（三）、ISO 13843《水质 微生物检测方法确认指南》
ISO 13843适用于选择性定量方法，可以是直接基于显微镜计数，或是间接基于生成的菌落或浊度。该范围内的工作原理和程序通常被称为检出＼未检出、最大可能数（MPN）、菌落计数和直接（显微）计数。【4】
三、AOAC关于食品微生物检测方法的确认
AOAC在检验方法的开发、验证、审定、规范化和标准化方面的开创性工作，得到了国内外的许多组织机构的承认和应用，是一个比较权威的致力于食品和农业领域的分析方法验证和认可的国际组织。检测方法需要得到AOAC的确认时，都必须按照一套完整和严密的评价程序。为适合不同客户的需求，AOAC制定了官方方法确认、同行验证和性能测试三种程序，对食品微生物学分析方法进行确认。
当需要最高可信度时，采用AOAC官方方法确认程序，由于AOAC官方方法经过了彻底和严格的测试，在全世界范围内具有权威性，常常为ISO、CAC、IDF所采用。
当需要较快的确认速度和较低的可信度时，采用AOAC同行验证程序，同行验证程序是通过一个简易的过程，为那些不适于采用完整协同研究进行验证的方法，提供了一个被AOAC认可的进入点。
当需要对试剂盒进行评价时，则采用AOAC研究所性能测试程序。
四、美国关于食品微生物检测方法的确认技术
（一）、美国环境保护局的方法确认。适用于EPA微生物檢测标准方法或标准方法改进后的确认，亦适用于有关测定环境微生物以及抗菌药物药敏试验的所有方法。典型的方法确认包括样品处理，提取或分离（微生物或核酸）程序，以及对待分析物的分析检测，包括一系列分析物的确认。
（二）、美国食品药品监督管理局的方法确认。适用于所有FDA在机构监管能力范围内开发和参与食品分析方法确认的实验室，包括所有的研究实验室和现场实验室。
（三）、美国农业部食品安全检验局的方法确认。是为了指导一些机构设计或研究食源性致病菌检测方法的确认，这些机构包括检测试剂盒制造商、实验室和独立验证机构。是肉、禽、蛋产品、环境样品的方法确认。该文件不适用微生物的计数方法。
五、新加坡关于食品微生物检测方法的确认技术
新加坡认可委员会--新加坡实验室认可方案（SAC-SINGLAS）于2002年7月发布了《微生物检测方法确认指导书》，主要涉及食品、水以及药品的微生物检测方法的确认，尤其是对传统意义上的定量方法的确认做出了指导。
涉及食品、水以及药品的微生物检测方法的确认，侧重于菌落总数、最大可能数（MPN）以及选择性培养基上的特定目标菌的计数等传统定量方法的确认。由于传统定量方法的检测原理是菌落计数或者是测定液体培养物的浊度，而现代快速检测方法则是依靠测量微生物活性产物的数量或变化来定量的，因此该方法不适用于现代快速检验方法的确认。【5】
微生物检测方法的确认可分为主要确认和次要确认。主要确认也称全面确认，是指通过提供客观证据对特定的预期用途或应用要求已得到满足的认定。次要确认也称验证，是指通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定。【6】
六、澳大利亚关于食品微生物检测方法的确认技术
AS＼NZS 4659《食品微生物检测方法等效评定指南》，本标准有澳大利亚和新西兰食品微生物学委员会FT＼4联合编写，其目的是为微生物测试方法等效性评定提供指导。内容主要为如何确定某一替代方法的检测结果与澳大利亚标准或澳大利亚＼新西兰联合标准方法一致，是最早对方法等效性验证进行规定的标准之一。
本标准由4个子标准组成：定性试验、定量试验、证实试验、抗生素检测。
一个替代方法若能给出澳大利亚或澳大利亚＼新西兰标准方法相同的结果，即可以被视为有效，但仅指对试验所用的基质有效。验证研究的应用重点在于使用的方法和试验基质，而非进行验证试验的实验室或人员，这意味着对某一特定基质的方法验证可通过验证报告而被另一个实验室采纳。【7】
总之，随着检测范围的扩展、检测要求的提高，实验室总是不断地扩展新的检测项目，新的检测领域，采用新的标准方法，有时候还需要采用实验室方法或非标准方法进行检测。实验室在采用某一检验方法前，无论是标准方法还是非标准方法，或者对标准方法进行偏离时，都应通过核查并提供客观证据，以证实这些方法或改变适合于预期用途。所以说方法验证和确认是非常重要的工作。
参考文献：
[1]SN＼T 3266-2012食品微生物检测方法确认技术规范[S].
[2]ISO 16140-2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs-Protocol for the validation of alternative methods[S].
[3]ISO＼TC 34＼SC 9N 593实验室内方法确认[S].
[4]ISO＼TR 13843 Water quality-Guidance on validation of microbiological methods[S].
[5]http：//www.sac-accreditation.org.sg/index.asp[OL].
[6]雷质文.食品微生物实验室质量管理手册[M].北京：中国标准出版社.
[7]AS-ZNS 4659 Guide to determining the equivalence of food microbiology test methods[S].