论文部分内容阅读
【摘 要】目的：建立鯊鱼中硒的微波消解氢化物原子荧光光谱测定方法。方法：样品经微波消解，在铁氰化钾-盐酸体系中， 用硼氢化钾作还原剂，采用氢化物原子荧光光谱法测定。结果：硒浓度在0～25ug/l的范围内线性良好，相关系数r=0.9997，方法检出限为0.13ug/l，样品检出限0.016mg/kg，相对标准偏差1.45%～3.23%，回收率93%～102%。结论：该法灵敏度高，准确度好，精密度高，干扰少，简便适用，适合鲨鱼中硒的测定。
【关键词】鲨鱼；硒；微波消解；氢化物原子荧光光谱法
【中图分类号】R657 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0143—02
鲨鱼肉中富含微量元素硒【1】，硒是一种多功能的生命营养素，人体对硒的最佳摄入量范围很小，硒的安全和适宜摄入量为50～400ug∕d【2】。福建闽东地区地处我国东南沿海，毗邻台湾海峡，拥有天然深水良港---三都澳，水产丰富，盛产鲨鱼。建立一种鲨鱼肉中硒含量的简便、快速、准确测定方法，对研究鲨鱼营养成分和评估其经济价值具有一定意义。目前硒的测定方法有化学比色法、分子荧光光度法、原子吸收法、极谱法、原子荧光法等。氢化物原子荧光光谱法是新近发展起来的方法，也是卫生部食品中硒测定的标准方法（GB/T5009.93---2003），关于该方法的应用已有报道【3，4】，但测定鲨鱼中硒未见报道。本法经过改进，利用微波消解消化技术，对鲨鱼中的硒进行氢化物原子荧光光谱法测定，可提高消化速度，减少被测物损失，消除环境导致的污染，可实现自动化，对实验人员无危害。现将结果汇报如下。
1 材料与方法
1.1 仪器 AFS—2202E双道原子荧光光度计（北京海光仪器公司）；硒空心阴极灯（北京有色金属研究总院）；XT—9800型多用预处理加热仪（上海新拓）；XT—9900型智能微波消解仪（上海新拓）。玻璃器皿经10%硝酸浸泡24小时处理，去离子水清洗后使用。
1.2 试剂和标准物质 测定用水为去离子水，本法所用试剂均为优级纯，硝酸；过氧化氢；载流：盐酸（5%，V/V），取50 ml盐酸倒入500 ml去离子水中，定容至1000 ml；硼氢化钾溶液（1.5%，W/V）：称取2g氢氧化钾溶于200ml去离子水中，加入6g硼氢化钾并溶解，用去离子水稀释至400ml，用时现配；铁氰化钾（100g/L）：称取10g铁氰化钾溶于100ml去离子水中，混匀；硒标准溶液（100ug/ml）：购自国家标准物质研究中心，使用时用5%HCL逐级稀释到所需浓度。
1.3 测定方法
1.3.1 微波消解条件 样品消解程序：5MPa，60s；10 MPa，90s；15 MPa，120s；20 MPa，180s；
25 MPa，240s。
作者简介：章亚彦（1967-），男，本科，副主任技师。主要从事卫生理化检验工作
1.3.2 样品处理 取鲨鱼可食部分，匀浆备用。称取样品0.2000g于溶样杯中，加7ml浓硝酸，晃动溶样杯，混合均匀，在多用预处理加热仪上消化至无红色烟后，冷却，加3ml过氧化氢，置于微波炉进行消解。消解结束后，加入2ml6mol/L盐酸，在多用预处理加热仪上加热，到溶液变为清亮无色伴有白烟出现，溶液剩1ml左右。将消解后溶液移入25ml比色管中，加入浓盐酸2 ml，加入1ml铁氰化钾溶液，用5%盐酸定容至刻度。摇匀，静置30分钟。同时做样品空白试验。
1.3.3标准曲线配制 吸取100ug/ml硒标准液，用5%盐酸逐级稀释到0.25ug/ml。吸取0.25ug/ml硒标准应用液0.00、0.10、0.50、1.00、1.50、2.00 、2.50 ml于25 ml比色管中， 相当于含硒0、0.025、0.125、0.250、0.375、0.500、0.625ug。按上述样品处理步骤，配置成0、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ug/l的硒标准系列。
1.3.4 仪器条件与参数 硒光电倍增管负高压310V；灯电流80mA；，辅助灯电流40mA；原子化器炉温200℃；原子化器高度8mm；载气（氩气）流量400 ml/min；屏蔽气流量1000ml/min；读数时间10s；延迟时间1.0s；重复次数1；测量方式Std. Curve（标准曲线法）；读数方式Peak Area（峰面积）；空白判别值5。
1.3.5 测定步骤 安装硒空心阴极灯，打开AFS—2202E双道原子荧光光度计电源，仪器联机自检。设定好仪器工作条件和参数，原子化器点火，仪器预热30分钟。进行标准空白溶液测量，进行系列标准溶液测量，冲洗，进行样品空白溶液测量，输入未知样品信息，进行未知样品测量。仪器自动生成工作曲线并计算结果，数据存盘，打印报告。
2 结果与讨论
2.1 线性范围、标准曲线及最低检出限 按本法对硒标准系列溶液进行测定，结果表明，硒浓度在0～25ug/l范围呈线性关系，回归方程If=53.125×C-5.452，相关系数r=0.9997。对空白溶液连续测定11次，根据公式DL=3×SD/K，计算出仪器检出限为0.13ug/l，若取样0.2g，本方法样品最低检出限0.016mg/kg。
2.2 精密度 对5 ug/l、10 ug/l、25 ug/l三种浓度硒标准溶液及0.61 mg/kg样品分别连续测定11次，根据测定值计算相对标准偏差RSD，结果分别为3.10%、2.41%、1.45%、3.23%。
2.3 样品加标回收率 取2份含量不同的样品（鲨鱼1、鲨鱼2），分别加入0.25ug/ml的硒标准应用液0.20ml、1.00ml（相对于硒0.05ug、0.25ug），按上述样品测定方法处理，进行回收率试验。结果见表1 。 2.4 样品的消化 试验表明，本试验采用硝酸+过氧化氢（7+3）混合酸为消化液。采用程序升压方式，样品消解程序：5MPa，60s；10 MPa，90s；15 MPa，120s；20 MPa，180s；25 MPa，240s为合适。
2.5 仪器工作条件的选择 在含硒15ug/l反应体系中，1.5%硼氢化钾溶液作还原剂，5%鹽酸溶液作载流，进行试验。经实验，采用负高压310V，定灯电流80mA，原子化器高度为8mm，载气流量400 ml/min、屏蔽气流量1000 ml/min为最佳。
2.6 反应介质的选择 在上述工作条件下进行试验，选用5%盐酸溶液作为载流，选用硼氢化钾浓度1.5%为合适。
2.7 干扰试验 在上述选定试验条件下， 15ug/l硒中分别加入下列离子进行干扰试验，相对误差≤5%，20000倍Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Al3+，1000倍Fe2+、Mn2+、Zn2+、Pb2+，200倍Cu2+、Ni2+、As3+、Sn2+、Hg+、Cd2+、Sb3+，均不干扰测定。试验表明，加入铁氰化钾作为掩蔽剂，效果良好。
2.8 本法与国标法比较试验
本法用硝酸+过氧化氢（7+3）微波消解对样品消化，而国标法用硝酸+高氯酸（4+1）混合酸湿法消化。样品来自于本地盛产小鲨鱼，用两种消化方法，按上述测定方法进行测定。结果见表2。
经统计学检验P>0.05，无显著性差异。
3小结
实验结果表明，利用微波消解消化技术，氢化物原子荧光光谱法测定鲨鱼中的硒，具有较高的灵敏度、准确度、基体干扰少、样品用量少、所耗试剂少、便于操作等优点。结果令人满意，适合鲨鱼中硒的测定
参考文献：
[1] 福建省食物营养成分表[M]. 福州：福建省科学技术出版社，1991：40—41
[2] 罗海吉，吉雁鸿. 硒的生物学作用与意义[J]. 微量元素与健康研究，2000，17（2）：70—72
[3] 杨艳，林坚，刘丽菁. 氢化物原子荧光光谱法测定灵芝中的硒[J]. 海峡预防医学杂志，2012，18（3）：56—57
[4] 陈宇鸿，沈仁富. 湿消解原子荧光法测定茶叶中的硒[J]. 中国卫生检验杂志，2010，20（10）：2427—2428
【关键词】鲨鱼；硒；微波消解；氢化物原子荧光光谱法
【中图分类号】R657 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0143—02
鲨鱼肉中富含微量元素硒【1】，硒是一种多功能的生命营养素，人体对硒的最佳摄入量范围很小，硒的安全和适宜摄入量为50～400ug∕d【2】。福建闽东地区地处我国东南沿海，毗邻台湾海峡，拥有天然深水良港---三都澳，水产丰富，盛产鲨鱼。建立一种鲨鱼肉中硒含量的简便、快速、准确测定方法，对研究鲨鱼营养成分和评估其经济价值具有一定意义。目前硒的测定方法有化学比色法、分子荧光光度法、原子吸收法、极谱法、原子荧光法等。氢化物原子荧光光谱法是新近发展起来的方法，也是卫生部食品中硒测定的标准方法（GB/T5009.93---2003），关于该方法的应用已有报道【3，4】，但测定鲨鱼中硒未见报道。本法经过改进，利用微波消解消化技术，对鲨鱼中的硒进行氢化物原子荧光光谱法测定，可提高消化速度，减少被测物损失，消除环境导致的污染，可实现自动化，对实验人员无危害。现将结果汇报如下。
1 材料与方法
1.1 仪器 AFS—2202E双道原子荧光光度计（北京海光仪器公司）；硒空心阴极灯（北京有色金属研究总院）；XT—9800型多用预处理加热仪（上海新拓）；XT—9900型智能微波消解仪（上海新拓）。玻璃器皿经10%硝酸浸泡24小时处理，去离子水清洗后使用。
1.2 试剂和标准物质 测定用水为去离子水，本法所用试剂均为优级纯，硝酸；过氧化氢；载流：盐酸（5%，V/V），取50 ml盐酸倒入500 ml去离子水中，定容至1000 ml；硼氢化钾溶液（1.5%，W/V）：称取2g氢氧化钾溶于200ml去离子水中，加入6g硼氢化钾并溶解，用去离子水稀释至400ml，用时现配；铁氰化钾（100g/L）：称取10g铁氰化钾溶于100ml去离子水中，混匀；硒标准溶液（100ug/ml）：购自国家标准物质研究中心，使用时用5%HCL逐级稀释到所需浓度。
1.3 测定方法
1.3.1 微波消解条件 样品消解程序：5MPa，60s；10 MPa，90s；15 MPa，120s；20 MPa，180s；
25 MPa，240s。
作者简介：章亚彦（1967-），男，本科，副主任技师。主要从事卫生理化检验工作
1.3.2 样品处理 取鲨鱼可食部分，匀浆备用。称取样品0.2000g于溶样杯中，加7ml浓硝酸，晃动溶样杯，混合均匀，在多用预处理加热仪上消化至无红色烟后，冷却，加3ml过氧化氢，置于微波炉进行消解。消解结束后，加入2ml6mol/L盐酸，在多用预处理加热仪上加热，到溶液变为清亮无色伴有白烟出现，溶液剩1ml左右。将消解后溶液移入25ml比色管中，加入浓盐酸2 ml，加入1ml铁氰化钾溶液，用5%盐酸定容至刻度。摇匀，静置30分钟。同时做样品空白试验。
1.3.3标准曲线配制 吸取100ug/ml硒标准液，用5%盐酸逐级稀释到0.25ug/ml。吸取0.25ug/ml硒标准应用液0.00、0.10、0.50、1.00、1.50、2.00 、2.50 ml于25 ml比色管中， 相当于含硒0、0.025、0.125、0.250、0.375、0.500、0.625ug。按上述样品处理步骤，配置成0、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ug/l的硒标准系列。
1.3.4 仪器条件与参数 硒光电倍增管负高压310V；灯电流80mA；，辅助灯电流40mA；原子化器炉温200℃；原子化器高度8mm；载气（氩气）流量400 ml/min；屏蔽气流量1000ml/min；读数时间10s；延迟时间1.0s；重复次数1；测量方式Std. Curve（标准曲线法）；读数方式Peak Area（峰面积）；空白判别值5。
1.3.5 测定步骤 安装硒空心阴极灯，打开AFS—2202E双道原子荧光光度计电源，仪器联机自检。设定好仪器工作条件和参数，原子化器点火，仪器预热30分钟。进行标准空白溶液测量，进行系列标准溶液测量，冲洗，进行样品空白溶液测量，输入未知样品信息，进行未知样品测量。仪器自动生成工作曲线并计算结果，数据存盘，打印报告。
2 结果与讨论
2.1 线性范围、标准曲线及最低检出限 按本法对硒标准系列溶液进行测定，结果表明，硒浓度在0～25ug/l范围呈线性关系，回归方程If=53.125×C-5.452，相关系数r=0.9997。对空白溶液连续测定11次，根据公式DL=3×SD/K，计算出仪器检出限为0.13ug/l，若取样0.2g，本方法样品最低检出限0.016mg/kg。
2.2 精密度 对5 ug/l、10 ug/l、25 ug/l三种浓度硒标准溶液及0.61 mg/kg样品分别连续测定11次，根据测定值计算相对标准偏差RSD，结果分别为3.10%、2.41%、1.45%、3.23%。
2.3 样品加标回收率 取2份含量不同的样品（鲨鱼1、鲨鱼2），分别加入0.25ug/ml的硒标准应用液0.20ml、1.00ml（相对于硒0.05ug、0.25ug），按上述样品测定方法处理，进行回收率试验。结果见表1 。 2.4 样品的消化 试验表明，本试验采用硝酸+过氧化氢（7+3）混合酸为消化液。采用程序升压方式，样品消解程序：5MPa，60s；10 MPa，90s；15 MPa，120s；20 MPa，180s；25 MPa，240s为合适。
2.5 仪器工作条件的选择 在含硒15ug/l反应体系中，1.5%硼氢化钾溶液作还原剂，5%鹽酸溶液作载流，进行试验。经实验，采用负高压310V，定灯电流80mA，原子化器高度为8mm，载气流量400 ml/min、屏蔽气流量1000 ml/min为最佳。
2.6 反应介质的选择 在上述工作条件下进行试验，选用5%盐酸溶液作为载流，选用硼氢化钾浓度1.5%为合适。
2.7 干扰试验 在上述选定试验条件下， 15ug/l硒中分别加入下列离子进行干扰试验，相对误差≤5%，20000倍Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Al3+，1000倍Fe2+、Mn2+、Zn2+、Pb2+，200倍Cu2+、Ni2+、As3+、Sn2+、Hg+、Cd2+、Sb3+，均不干扰测定。试验表明，加入铁氰化钾作为掩蔽剂，效果良好。
2.8 本法与国标法比较试验
本法用硝酸+过氧化氢（7+3）微波消解对样品消化，而国标法用硝酸+高氯酸（4+1）混合酸湿法消化。样品来自于本地盛产小鲨鱼，用两种消化方法，按上述测定方法进行测定。结果见表2。
经统计学检验P>0.05，无显著性差异。
3小结
实验结果表明，利用微波消解消化技术，氢化物原子荧光光谱法测定鲨鱼中的硒，具有较高的灵敏度、准确度、基体干扰少、样品用量少、所耗试剂少、便于操作等优点。结果令人满意，适合鲨鱼中硒的测定
参考文献：
[1] 福建省食物营养成分表[M]. 福州：福建省科学技术出版社，1991：40—41
[2] 罗海吉，吉雁鸿. 硒的生物学作用与意义[J]. 微量元素与健康研究，2000，17（2）：70—72
[3] 杨艳，林坚，刘丽菁. 氢化物原子荧光光谱法测定灵芝中的硒[J]. 海峡预防医学杂志，2012，18（3）：56—57
[4] 陈宇鸿，沈仁富. 湿消解原子荧光法测定茶叶中的硒[J]. 中国卫生检验杂志，2010，20（10）：2427—2428