【摘 要】
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α-L-鼠李糖苷酶(EC 3.2.1.40),是一种在工业上有着重要应用的食品酶,属于糖苷水解酶类,能够水解天然及合成的具有糖苷类的物质末端的鼠李糖基.本实验以实验室前期构建成功的α-L-鼠李糖苷酶重组质粒(pPIC9 K-rha)为模板,采用易错PCR的方法,建立库容量为2×105,阳性克隆率为92％的突变库.基于酵母异源表达产生胞外酶的原理,构建了96孔板筛选法,最终从3000个转化子中筛选得
【机 构】
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α-L-鼠李糖苷酶(EC 3.2.1.40),是一种在工业上有着重要应用的食品酶,属于糖苷水解酶类,能够水解天然及合成的具有糖苷类的物质末端的鼠李糖基.本实验以实验室前期构建成功的α-L-鼠李糖苷酶重组质粒(pPIC9 K-rha)为模板,采用易错PCR的方法,建立库容量为2×105,阳性克隆率为92％的突变库.基于酵母异源表达产生胞外酶的原理,构建了96孔板筛选法,最终从3000个转化子中筛选得到了5株热稳定性改变的突变体.通过热稳定性研究发现,突变酶D80N/V529A在65℃条件下,热稳定性比原始型α-L-鼠李糖苷酶(WT)提高了10分钟.另外四个突变酶的热稳定性显著降低,且均在600位氨基酸附近存在氯基酸突变,由此推测600位氨基酸附近区域为影响热稳定性的有效区域.
其他文献
本文对比了以新型硅铝溶胶粉(矽奥)为结合剂的无水泥抗粘铝浇注料和普通低水泥抗粘铝浇注料在铝工业应用下的性能差异.结果表明,以硅铝溶胶粉为结合剂的抗粘铝浇注料,避免了引入钙杂质,获得了更优异的抗粘铝性能;烘烤时,硅铝溶胶粉结合的浇注料更容易排净水分,避免了高温时结合水使铝液增氢,获得了高品质的铝液.抗粘铝实验显示,硅铝溶胶粉结合的浇注料的抗粘铝性能优于低水泥浇注料.热重实验表明硅铝溶胶粉结合的浇注料
使冶炼铝达到最高的回收率一直是最大的挑战.铝工业经过50年的发展,铝废料及氧化物已变废为宝.铝冶炼过程产生炉渣.炉渣的带走游离铝.尽量减少两种熔炼中铝的损失是熔炼厂开发炉渣处理方法的责任.过去50年中在这方面取得了实质性的进步,同时铝行业也在不断的发展.提出历史上的渣滓处理方法有：人工挑选，地板冷却，搅拌，振动台／振动器／搅拌器，旋转冷却器／振动器／搅拌器，铸钢渣滓锅，离心机，惰性气体渣滓冷却，热
概述了降低炉渣生成量和提高炉渣铝回收率的意义,分析了影响熔损的因素及改进措施,指出了影响炉渣中金属含量的因素及提高炉渣中铝回收率的多种方法,其中,等离子体速溶法值得国内迅速开发.铝渣中含有的金属不能完全回收是造成金属损失的重要原因之一。浮渣从炉膛中扒出后不直接被冷却，那么浮渣中所含金属就有一部分被燃烧掉（铝的微粒在高于燃点温度约750℃下燃烧）。一种普遍接受的观点是：热态炉渣中金属成份的氧化速率为
牛初乳中含有多种具有重要生理活性的寡糖,但是由于对牛初乳中寡糖的研究较少且缺乏有效分离提取方法,导致牛初乳资源极大浪费.本研究是以光明牧场牛初乳为原料,采用膜技术对牛初乳中的功能性寡糖进行初步分离,构建出一种新型树脂介质进一步分离纯化,并利用液质联用方法对纯化得到的寡糖进行结构鉴定.结果表明：10kDa超滤膜可以去除98.9％的蛋白质且总糖的回收率为96.7％；利用500Da纳滤膜去除了部分乳糖及
为了更好的利用罗非鱼加工副产物,本文以罗非鱼下脚料——鱼皮为发酵基质,接种纳豆枯草芽孢杆菌共培养36h后,通过测定溶纤酶活性,对碳源类型(果糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖和葡萄糖)、碳源添加量、初始pH等影响发酵产物纤溶酶活性的8个条件进行了优化.利用Tricine-SDS-PAGE考察发酵产物分子量变化,并用采用全自动氨基酸分析仪测定了发酵产物的氨基酸组成.实验结果表明果糖为最佳碳源；其他最佳发酵条件
为了开发新的功能性海参卵产品,本实验以刺参加工副产物——海参卵为原料,作为纳豆枯草芽孢杆菌发酵基质,以溶纤酶活性作为评价标准,考察不同发酵条件对发酵产物中溶纤酶活性的影响.结果显示,最适发酵碳源为葡萄糖,最适葡萄糖添加量2％(m/v)、初始pH7.0、接种量5％ (v/v)、发酵温度37℃、装载量20％(v/v)、料液比1∶20 (m/v)、摇床转速180rpm.海参卵发酵产物经7000rpm,离
微生物生长变异在食品安全风险评估中起着重要作用,为比较环境因素及培养基质对副溶血性弧菌生长动力学差异,本研究应用Bioscreen.C全自动微生物生长曲线分析仪结合梯度稀释法对50株不同来源和不同基因型的副溶血性弧菌在不同温度30℃、37℃和不同纯培养条件APW、TSB (3％ NaCl,pH8.0)下的最大比生长速率(μmax)进行了比较分析.结果证明菌株生长变异性随着生长条件温度和培养基质变化
微生物群落在食品质量和安全中起着重要的作用，被认为是导致食品腐败和食源性疾病的主要原因。基于PCR-DGGE的变性梯度凝胶电泳和16SrRNA基因克隆文库进行分析，对东南沿海的五个城市(上海、杭州、福建、宁波、福州)水产品进行检测。结果表明：变形菌门、厚壁菌门在五个城市中占主要地位，五个城市的水产品中都检测出弧菌属、巨球菌属。上海检测出不动杆菌属最多；其中发光杆菌属在厦门、福州作被检测；肠球菌属、
本文以Pseudoalteromonas carrageenoora AS5菌株中的car基因序列为研究对象,通过PCR克隆卡拉胶酶基因,将它克隆至表达载体pET-28a,以期获得稳定性较高的酶,并实现大量制备卡拉胶酶的目的.利用生物信息学方法分析该基因及其推测出的编码蛋白理化性质、蛋白的亲水性或疏水性、预测信号肽、跨膜结构域、蛋白二级结构、三级结构等特征.结果表明,ASY5菌株的的car基因开放
本试验以实验室克隆表达的产琼脂硫酸酯酶的重组大肠杆菌(E.coli-ars)为研究对象,首先在摇瓶中对其诱导条件进行单因素优化,得到最佳条件为：诱导温度21℃,诱导时间24h,诱导剂α-乳糖4g/L,诱导初始菌浓度(OD600)0.6；然后在5L罐中对菌株进行发酵,在发酵过程中进行补料试验,结果表明补料提高了生物量,但是对酶活力没有促进效果.最后在摇瓶及5L罐发酵基础上,分别进行20 L和200L