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目的：通过建立心跳骤停大鼠模型,运用流式细胞术检测脾脏单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例,来观察iPS-MSCs是否通过调节CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例来发挥免疫调理作用;通过q-PCR对与Treg、Th1、Th2细胞功能相关的基因进行检测,以研究iPS-MSCs对心脏骤停后炎症免疫紊乱发挥调理作用的分子机制.
方法：选用老年雄性Wistar大鼠60只,取其中48只通过经皮电刺激心外膜方法制作大鼠心脏骤停模型,并将复苏成功的24只大鼠随机分为2组：iPS-MSCs干预组在复苏后经静脉注射iPS-MSCs,PBS组则相应的注射PBS液;另外12只健康大鼠作为假手术组,复苏24h后观察大鼠存活情况并记录;无菌分离大鼠脾脏,提取脾脏单个核细胞,通过流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例;提取大鼠肝脏总RNA,运用荧光定量PCR对其中与本Treg、Th1、Th2细胞功能相关的基因(IL-10、IL-1β、IFN-γ及TNF)进行分析.
结果：通过经皮电刺激心外膜致颤成功建立大鼠心脏骤停模型;iPS-MSCs干预组与PBS对照组的24h存活率比较,差别有统计学意义(p＜0.05).流式细胞仪分析脾脏单个核细胞CD4+CD25+Foxp3+T细胞/CD4+CD25+T细胞比例示PBS组较Sham-operation组明显升高(p＜0.01);iPS-MSCs组较PBS明显降低(p＜0.01).肝脏IL-10、IL-1β、IFN-γ及TNF等4个基因的荧光定量PCR结果表明,同Sham-operation组相比较,PBS组IL-10、Ⅱ-1β、IFN-γ及TNF mRNA的表达均升高,均有统计学意义(p＜0.05);同PBS组比较,iPS-MSCs组IL-10mRNA的表达明显升高(p＜0.05);然而,iPS-MSCs组IL-1β、IFN-γ、及TNF mRNA的表达则明显下降(p＜0.01).
结论：iPS-MSCs可明显提高复苏后大鼠24h存活率;iPS-MSCs可以通过下调Treg细胞比例影响Th1/Th2比例,进而促进IL-10的分泌并抑制炎症因子IL-1β、IFN-γ、TNF的分泌,从而调节炎症/抗炎反应,纠正免疫紊乱.