【摘 要】
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本文采用RACE PCR技术克隆出褶纹冠蚌中Keap1a、Keap1b的c DNA全长序列,Keap1a基因c DNA序列全长2952 bp,其中5’非编码区有762bp,3’非编码区有351bp,开放阅读框长度为1839 bp,共编码612个氨基酸,经Expasy在线网站的Signal P分析氨基酸发现该蛋白无信号肽序列,该蛋白理论分子量为68.33KDa,等电点为6.80;Keap1b基因c
【出 处】
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2017年中国水产学会学术年会论文摘要集
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本文采用RACE PCR技术克隆出褶纹冠蚌中Keap1a、Keap1b的c DNA全长序列,Keap1a基因c DNA序列全长2952 bp,其中5’非编码区有762bp,3’非编码区有351bp,开放阅读框长度为1839 bp,共编码612个氨基酸,经Expasy在线网站的Signal P分析氨基酸发现该蛋白无信号肽序列,该蛋白理论分子量为68.33KDa,等电点为6.80;Keap1b基因c DNA序列全长3710bp,其中5’非编码区有87bp,3’非编码区有1928bp,开放阅读框1695bp,共编码564个氨基酸,经分析氨基酸发现该蛋白无信号肽序列,该蛋白理论分子量为63.88KDa,等电点为5.28;利用实时荧光定量PCR检测了Keap1a、Keap1b基因在褶纹冠蚌不同组织中的表达情况,结果表明在血液、外套膜、肌肉、腮和肝胰脏中均有表达,但表达量存在一定差异,Keap1a、Keap1b都在肝胰脏中的表达量最高,肌肉中次之,外套膜中表达量最低。经微囊藻毒素刺激后,Keap1a、Keap1b基因在血细胞和肝胰脏中的表达都呈下调趋势,两个基因在血细胞和肝胰脏中的表达都表现出显著差异。截取Keap1a、Keap1b基因的C端保守区域和表达载体PET-32a经Bamh1和Xho I1双酶切之后,连接并成功构建了PET-32a-Keap1a-DC和PET-32a-Keap1b-DC原核表达质粒。将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta-gami（DE3）中进行原核表达,加入IPTG至终浓度为1mmol/L,37℃诱导8h,得到大量的融合蛋白,通过超声破碎对其上清和沉淀进行SDS-PAGE蛋白胶电泳检测,结果表明重组蛋白已包涵体形式存在。
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