眼镜蛇科蛇毒L-氨基酸氧化酶的分子特征

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通过 Sephadex G-100凝胶过滤、Resource Q 离子交换以及肝素亲和柱柱层析,从眼镜王蛇中分离纯化得到了一个 L-氨基酸氧化酶(Oh-LAAO)。Oh-LAAO 在非还原以及还原条件下分子量分别约为64kDa 和67kDa,糖蛋白染色表明它是一个糖蛋白。Oh-LAAO 本身不具有血小板聚集活性。它对 ADP 以及 U46619引起的血小板积聚有明显的抑制作用而对 Thrombin、mucetin、Restocetin 以及 Stejnulxin 所引起的血小板聚集无影响。通过 PT-PCR 以及5’-RACE 方法,我们从眼镜王蛇毒腺总 RNA 中获得了 Oh-LAAO 的 cDNA 全序列。Oh-LAAO 的开放阅读框架(ORP)由1476bp 组成,包含了25个氨基酸残基组成的信号肽以及466个氨基酸残基组成的成熟肽。由 cDNA 序列推导的 Oh-LAAO 蛋白质序列的正确性通过 N-末端蛋白质序列测定、胰蛋白酶水解内肽氨基酸序列测定以及肽指纹图谱得以确定。同时,编码金环蛇以及银环蛇 L-氨基酸氧化酶的 ORP 得到了克隆,编码眼镜蛇 L-氨基酸氧化酶的部分 cDNA 序列得到了克隆。结果表明:Oh-LAAO 与其它蛇毒来源的蛋白质序列一致性约为50%,揭示了 Oh-LAAO 在进化上与其它蛇毒 L-氨基酸氧化酶相距较远。
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