【摘 要】
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利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合,并将融合后的基因克隆至真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-U-M。利用真核表达质粒DNA免疫小鼠,通过检测体液免疫反应与细胞免疫反应进一步研究pVAX-U-M的免疫效果。IFA试验结果表明,真核表达质粒pVAX1-U-M 能够在BHK-21细胞内成功表达目的基因,小鼠免疫试验结果表明,真核表达质粒p
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,农业部兽医公共卫生重点开放实验室,啥尔滨 150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会
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利用SOE技术将PRRSV M基因与小鼠泛素(Ubiquitin,Ub)基因融合,并将融合后的基因克隆至真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-U-M。利用真核表达质粒DNA免疫小鼠,通过检测体液免疫反应与细胞免疫反应进一步研究pVAX-U-M的免疫效果。IFA试验结果表明,真核表达质粒pVAX1-U-M 能够在BHK-21细胞内成功表达目的基因,小鼠免疫试验结果表明,真核表达质粒pVAX1-U-M能够在小鼠体内诱生PRRSVELISA抗体与细胞免疫反应。但是,ELIsA抗体水平比较低,而细胞免疫的水平则相对较高。这说明泛素在一定程度上可以促进PRRSV M基因诱导细胞免疫反应,但对体液免疫未见到同样作用。本研究的结果为进一步探讨PRRSVM蛋白在免疫中的作用、泛素的功能,也为PRRS新型疫苗的研究提供基础数据。
其他文献
目的:观察探讨血管内皮生长因子在牛流行型白血病肿瘤组织中的表达、分布及其意义。方法：究采用免疫组化S.P方法首次对14例牛流行型白血病肿瘤组织及瘤旁组织中VEGF的表达、分布变化进行了研究。结果:EBL病牛淋巴结、心脏肿瘤组织中VEGF阳性细胞表达率分别为78.6％和90％,并见到肿瘤组织中绝大多数肿瘤细胞过量表达VEGF,均明显高于相应瘤旁组织,差异极显著(P<0.01)。还观察到血管内皮细胞和
用F81细胞对来自四川地区疑似感染细小病毒犬粪便进行病毒分离,并进行常规病毒学鉴定,设计犬细小病毒特异性引物,采用PCR技术扩增出VP2全长基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,测序并进行遗传进化分析。结果,分离到的该细小病毒,在F81细胞上出现明显的CPV病变,电镜观察可见细小病毒样粒子,并具有细小病毒理化特征,表明所分离病毒为CPV,将该分离株命名为CPV-CN-04-08-3。CPV-
鸡β-防御素gal-8是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。本研究从已构建的重组质粒pGEM-T Easygal-8中克隆出gal-8成熟肽cDNA,将该cDNA插入原核表达载体pNz8048,构建重组质粒pNZ8048-gal-8,然后将重组质粒电击转化乳酸乳球菌NZ9000中。经菌落PCR、双酶切、测序鉴定,成功构建了乳酸菌表达载体pNZ8048-gal-8。测序结果经Blast程序对比显示基因
07、08年某鸡场相继爆发鸡病毒性肝炎,为了确定病原和了解发病时患病鸡的病理学变化,分别对该鸡场的患病鸡进行了PCR检测和临床病理学研究。结果表明：患病鸡均呈FAV阳性,病鸡精神不振,食欲降低,嗜睡,一般无明显前驱症状,突然发病死亡。同时剖检后肝脏肿大、土黄色,表面有密集的小出血点或出血斑,以及-肾脏肿大、出血是本次发病鸡的突出病变。最终确诊本次发病是由禽腺病毒引起的鸡包涵体肝炎。
研究低氧环境下鸡胚肺血管内皮细胞源性内皮素-1对下层平滑肌细胞的影响。组织贴块法培养内皮细胞和平滑肌细胞,将内皮细胞培养于常氧和低氧环境中,于24h收集上清液过滤-20℃保存备用,并用放免法测定内皮细胞ET-1的分泌。采用CCK-8法检测平滑肌细胞的增殖,Fura2-AM检测平滑肌细胞内Ca2+浓度,RT-PCR检测内皮细胞ET-1mRNA和平滑肌细胞ETARmRNA的表达。低氧条件下内皮细胞分泌
为了建立区分内外源性JSRV的诊断方法，应用Cluster W对比enJSRV与exJSRV的序列差异，针对外源性前病毒序列设计上下游引物，提取健康羊肺组织及肺肿瘤组织、肺门淋巴结、肾组织、潜伏感染羊外周血单核细胞总DNA。结果表明特异性PCR法快速、灵敏，是针对于含前病毒量较高的死后羊肺肿瘤组织实用的诊断方法。从而成功排除了高拷贝数enJSRV的干扰，在国内首次建立了针对exJSRV长末端重复序
JSRV无病毒癌基因，病毒的Env蛋白能转化细胞致肺肿瘤，而内源性JSRV则在母羊生殖道内大量表达。内外源性JSRV的受体均为Hyal-2，该受体在羊、人类及鼠的细胞中无所不在，且过表达鼠Hyal2对JSRV在鼠N1H3T3和208F细胞中的转化没有影响。因而推测病毒的肺嗜性不是由于AT Ⅱ细胞和Clara细胞上的Hyal-2受体数量多，而是由于内外源性JSRV LTR的嗜性不同导致的，为了从分子
OPA感染羊无针对JSRV的循环性抗体，然而，患羊肺组织、淋巴网状内皮系统及外周血单核细胞均有前病毒DNA及JSRV的转录产物。目前，本研究组建立的血清学及特异性PCR方法能在肺肿瘤组织的检测中发挥作用，然而，对于活体羊，因血液样本含前病毒的载量很低，超过了前两种方法的检测阈值。为了寻找能应用于活体羊检测样本的新方法，本实验对比enJSRV与exJSRV的序列差异，针对外源性前病毒设计了两套引物，
为了解内外源性JSRV LTR的差别，从分子机制上分析内外源性JSRV-LTR的不同嗜性的机理，本实验克隆测序了健康山羊和绵羊的内源性JSRV-LTR，有益于了解JSRV的病毒学特性及与宿主共进化的关系。
绵羊肺腺瘤病病毒(Jaagsiekte retrovirus, JSRV)属于β反转录病毒，为线性单股正链RNA，全长7.4kb，编码相互重叠的gag,pro,pol,env基因。其中env基因的orf编码跨膜蛋白(transmembraneprotein.TM)和表面蛋白(surface protein,SU)。利用真核表达载体pCDNA3.1+，建立在细胞内稳定表达tm的HepG2细胞系，为进