论文部分内容阅读
目的：研究OCT4诱导人毛囊间充质干细胞(hHFMSCs)向红细胞分化的作用方法：(1)用携带OCT4的慢病毒转导hHFMSC,用RT-qPCR及Western Blot鉴定转导结果；(2) OCT4转导后的hHFMSC形态改变及造血标志物的表达；(3)造血相关的细胞因子诱导hHFMSCOCT4向红细胞分化：利用Wright-Giemsa染色观察细胞形态改变,细胞免疫荧光和流式细胞术检测红细胞特异性标志物；(4) RT-qPCR检测OCT4靶基因.结果：(1)携带OCT4慢病毒转导hHFMSC及鉴定：转导后的hHFMSCs中EGFP阳性细胞占88.92％,OCT4的mRNA和总蛋白表达明显上调.(2) OCT4转导后的hHFMSC形态改变及造血标志物的表达：①转导后细胞由大变小,由长梭形变成类圆形,14d后出现易悬浮的细胞亚群,呈克隆样生长；②OCT4转导后hHFMSCs中CD45阳性细胞占1.5％,悬浮的hHFMSCs中CD34阳性细胞占2.19％.(3)转导OCT4的hHFMSCs向红细胞分化：①光镜下观察,造血诱导第7d开始出现造血集落,10-20d先后出现红系爆炸式集落及红系集落形成单位；②Wright-Giemsa染色显示,第7d开始先后出现早幼红、中幼红和晚幼红细胞,第20d晚幼红细胞数量不再增加.③造血诱导第7-20d的细胞表达红系祖细胞标志CD71和CD235a,同时表达血型蛋白A和B；诱导第23d红细胞完成脱核,80％以上红细胞表达成人型β血红蛋白；④hHFMSC向红细胞分化中细胞直径及核质比逐渐减小,血红蛋白化逐渐增加.(4) hHFMSCs向红细胞分化中OCT4靶基因的表达：OCT4转导后,多潜能相关的靶基因OCT4、NANOG、SEMA3A和LEFTY2和造血相关的靶基因FLI1、TAL1、HBG1和CA2表达均上调.造血诱导21d后,多潜能相关的靶基因LEFTY2及OCT4显著下调,而造血相关的靶基因TAL1、HBG1和RHD表达显著上调.结论：(1)转录因子OCT4可以诱导hHFMSC向红细胞分化；(2)由hHFMSC分化的红细胞表达成人型血红蛋白；(3)转录因子OCT4通过调控造血相关靶基因的表达促使hHFMSC向红细胞分化.