【摘 要】
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目的 本研究重点关注IGFBP5在NSCLC中的表达情况,鉴定其对非小细胞肺癌干细胞自我更新的靶蛋白并探索分子机制,为肺癌的治疗提供潜在靶点。方法 1)RT-PCR和Western Blotting方法 检测原代NSCLC组织标本及无血清低粘附培养富集的NSCLC克隆球干细胞中IGFBP5表达情况；2)利用慢病毒载体构建IGFBP5稳定敲除的肺癌细胞系,检测IGFBP5对克隆球形成能力、动物致瘤能
【机 构】
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浙江大学医学院附属第二医院呼吸与危重症医学科
【出 处】
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2016中华医学会呼吸病学年会暨第十七次全国呼吸病学学术会议
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目的 本研究重点关注IGFBP5在NSCLC中的表达情况,鉴定其对非小细胞肺癌干细胞自我更新的靶蛋白并探索分子机制,为肺癌的治疗提供潜在靶点。方法 1)RT-PCR和Western Blotting方法 检测原代NSCLC组织标本及无血清低粘附培养富集的NSCLC克隆球干细胞中IGFBP5表达情况；2)利用慢病毒载体构建IGFBP5稳定敲除的肺癌细胞系,检测IGFBP5对克隆球形成能力、动物致瘤能力的影响；3)亲和串联质谱技术筛选IGFBP5靶蛋白,Co-IP鉴定其相互作用；4)构建IGFBP5靶蛋白的敲除细胞系,检测其对克隆球形成能力、iPS因子表达的影响。结果 1)IGFBP5在原代NSCLC组织标本及克隆球细胞(A549、H1299和H358)中表达显著上调；2)IGFBP5稳定敲除后体外克隆球形成数量减少,球体体积变小,动物致瘤能力下降；3)IGFBP5与RPL4存在相互作用；4)RPL4可增强克隆球形成能力,上调c-Myc这一关键iPS转录因子表达。结论 我们推测IGFBP5是肺癌干细胞中潜在的调控因子,可通过与RPL4相互作用,上调c-Myc表达,从而促进非小细胞肺癌干细胞的自我更新能力。
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