【摘 要】
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目的: 确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能,高致病性蓝耳病发病机理.以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础.方法: 根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到DBlueScript Ⅱ SK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心 动物传染病研究室 农业部动物寄生虫病重点实验室 上海 200232
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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目的: 确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能,高致病性蓝耳病发病机理.以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础.
方法: 根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分五段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到DBlueScript Ⅱ SK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接成JX143株的全长cDNA克隆pJX143和含有遗传标记Mlu Ⅰ限制性内切酶的基因组全长cDNA克隆pJX143-M.
结果: 全长cDNA克隆经体外合成RNA后转染MA-104细胞,均获得稳定的拯救病毒.通过比较亲本毒与拯救病毒的病毒滴度,多步生长曲线和利用拯救病毒vJX143进行动物回归试验,结果发现病毒学及生物学特性没有显著差异.
结论: PRRSV的JX143株病毒确实是引起"猪高热综合征"的主要病原;建立了首个高致病性PRRSV的感染性cDNA克隆,证明拯救病毒与亲本病毒生物学特性相同.
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