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采用碳二亚胺法,制备了环丙沙星-小牛血清蛋白偶联物,评价了pH、环丙沙星和碳二亚胺浓度对偶联结合比率的影响。同时采用红外光谱、紫外光谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱方法对偶联产物的基团、分子量等特征进行分析鉴定。正交试验结果表明,pH对环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联结合比率具有显著性差异,碳二亚胺和环丙沙星浓度差异性不显著。在pH 5.0,碳二亚胺和环丙沙星浓度分别为60mg/ml和5mg/ml的条件下,环丙沙星-小牛血清蛋白偶联结合比率为30:1。该方法的偶联成功,为获得针对环丙沙星的特异性单克隆抗体及其相应食品安全检测试剂盒的开发奠定了基础。