【摘 要】
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基于鱼类高效转座子的转基因策略是新一代的转基因技术,如最近日本学者发现的青鳉To12转座子,其转基因效率高于第1代线性化质粒注射方法10倍,可供大片段外源基因的转入,且畸
【机 构】
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上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海201306
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基于鱼类高效转座子的转基因策略是新一代的转基因技术,如最近日本学者发现的青鳉To12转座子,其转基因效率高于第1代线性化质粒注射方法10倍,可供大片段外源基因的转入,且畸形率低、整合位点检测方便,不会引入质粒骨架而干扰鱼类正常基因的表达,已广泛应用于模式生物斑马鱼的转基因和基因捕获研究。近几年来,我们通过在近20种淡、海水养殖鱼类和观赏鱼类中进行筛选,最终在我国一些金鱼品系中发现了一个新的、具有天然转座活性的hAT家族转座子,命名为金鱼Tgf2转座子,是迄今发现的第二例有自主转座活性的脊椎动物转座子。基于鱼类Tgf2转座子的利用体现在2个方面:(1)应用于淡、海水鱼类转基因研究。通过构建高效鱼类Tgf2转座元件,在鲫、团头鲂中受精卵中进行显微注射,其转基因的整合率大于50%,较日本学者发现的青鳉To12转座子的转基因效率提高约10%,高于第1代线性化质粒注射方法的10倍;具有大容量特征,最大可携带10kb以上的外源基因,并可实现精确切离和整合;后代畸形率低,整合位点检测方便等特点。(2)应用于淡、海水鱼类基因捕获。高效基因组插入诱变元件的构建和诱变体的获得,可用于养殖鱼类功能基因的捕获,配合我国正在进行的鱼类基因组测序计划,服务于这些养殖鱼类的分子设计和转基因育种,本文报道了该转座子在草鱼中进行插入诱变的初步结果。
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