【摘 要】
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目的：运用RNA亲和捕捉系统从人肝细胞cDNA噬菌体文库中筛选与丙型肝炎病毒负链3UTR RNA相互作用的宿主蛋白。方法：通过体外转录方法获得HCV(1b型)负链3UTRRNA，与生物素化的寡聚核苷酸杂交后偶联于链酶亲和素磁珠上，与人肝细胞cDNA噬菌体文库通过亲和捕捉、扩增的过程反复筛选与HCV负链YUTR RNA特异性结合的重组噬菌体，对筛选后得到的噬菌体进行序列测定和BL,AST基因同源性分
【机 构】
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第四军医大学微生物学教研室,西安,710032
【出 处】
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第七次全国医学分子微生物学及生物技术研讨会
论文部分内容阅读
目的：运用RNA亲和捕捉系统从人肝细胞cDNA噬菌体文库中筛选与丙型肝炎病毒负链3UTR RNA相互作用的宿主蛋白。
方法：通过体外转录方法获得HCV(1b型)负链3UTRRNA，与生物素化的寡聚核苷酸杂交后偶联于链酶亲和素磁珠上，与人肝细胞cDNA噬菌体文库通过亲和捕捉、扩增的过程反复筛选与HCV负链YUTR RNA特异性结合的重组噬菌体，对筛选后得到的噬菌体进行序列测定和BL,AST基因同源性分析。
结果：经过七轮筛选后，噬菌体文库高度富集，阳性克隆经过序列测定和基因同源性分析后，得到两种可与HCV负链3UTRRNA相互作用的蛋白。
结论：利用RNA亲和捕捉系统，以与链酶亲和素磁珠偶联的RNA为固相基质，从17噬菌体展示cDNA文库中筛选相互作用蛋白是一种快速、高效、特异性好的靶蛋白筛选方法。本研究为揭示宿主蛋白与HCVRNA的相互作用，进一步阐明HCV复制机制提供了实验依据。
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