目的构建人防御素HD5（D5）、力达霉素辅基蛋白（LDP）与EGFR配体寡肽（Ec）组合的融合蛋白,以期得到一种以防御素作为"效应"分子、以力达辅基蛋白为支架的、具有靶向EGFR功能的新型抗癌药物。方法主要采用基因工程的方法制备融合蛋白基因并将其表达纯化,得到融合蛋白Ec-LDP-D5。融合蛋白与细胞表面EGFR的亲和活性主要采用了ELISA、细胞免疫荧光化学法;采用CCK-8法测定融合蛋白对人胰腺癌细胞PNAC-1和Aspc-1的体外杀伤活性。结果表达该重组蛋白的质粒pET30a（+）/Ec-LDP-D5经过酶切鉴定和序列测定后,转化于大肠杆菌BL21（DE3）中,进行诱导表达,产物主要以包涵体的形式存在,目的蛋白经纯化、复性后,每升发酵液可以获得1 mg纯度达到85%以上有活性的Ec-LDP-D5融合蛋白。ELISA和基于流式细胞术的荧光试验结果显示,Ec-LDP-D5融合蛋白对EGFR高表达的肿瘤细胞系,如PNAC-1和Aspc-1细胞均有很强的结合活性,而对不表达EGFR的J774A.1细胞则无结合活性。细胞免疫荧光化学试验证实Ec-LDP-D5可与PNAC-1和Aspc-1细胞表面结合。CCK-8法检测PNAC-1和Aspc-1细胞结果表明,融合蛋白Ec-LDP-D5IC₅₀值为2.1×10^-6M和1.3×10^-6M。结论本研究构建并制备了一种含有防御素HD5和EGFR配体寡肽以及力达霉素辅基蛋白的融合蛋白Ec-LDP-D5,该融合蛋白可特异地与EGFR高表达的PNAC-1和Aspc-1细胞结合,对人的胰腺癌细胞株有显著的生长抑制作用。结果表明,Ec-LDP-D5是以防御素为"效应"分子的、具有EGFR靶向功能的新型抗肿瘤融合蛋白。