论文部分内容阅读
目的 本实验制备了超声可视的载磁性材料(铁Fe)及化疗药物(盐酸阿霉素DOX)相变型可注射原位植入物(DOX/PLGA-Fe),观察其在超高频交变磁场(AMF)中,体外磁热性能、热消融性能、药物控释性能,以及对裸鼠SMMC-7721人肝癌皮下移植瘤的磁热疗联合化疗的效果.方法 制备含不同铁质量分数(1％、10％、20％)的DOX/PLGA-Fe,将50 μL液固相变型后DOX/PLGA-Fe放入AMF中2 min,观察其温度的变化,确定能达到热消融的最佳Fe含量.将50 μL、铁含量为20％的液态DOX/PLGA-Fe(DOX/PLGA-20％Fe)超声引导下注入新鲜离体牛肝内,并放入AMF中2 min、3 min、5 min,超声下观察离体牛肝注射前后、消融前后的变化,并测量消融后牛肝凝固性坏死区域的面积,确定最佳体内试验消融时间.将50μL液态DOX/PLGA-20％Fe滴入含有1 ml PBS(pH 5.0、7.4)透析袋中(分子量：8,000～14,000),密封后放入含29 ml相同pH值PBS的容量为45 ml的离心管中,再将此离心管置于温度为37℃、转速为100 rpm的摇床中,每30 min取1ml离心管中释放液并补回同等体积相同pH的PBS,分别在0.5 h、2 h=6 h及21h4个时间点,将离心管置于AMF中10 s,最后通过紫外分光光度计测定每个样品的紫外吸收峰,得出其中DOX含量,最终计算出DOX的释放效率；将50 μl液态DOX/PLGA-20％Fe注入新鲜离体牛肝内,并放入AMF中2 min、3 min、5 min,加热完毕后,取离消融中心1cm处的组织,快速冰冻切片后,置于倒置荧光显微镜下观察其荧光强度.取15只荷SMMC-7721人肝癌皮下移植瘤裸鼠,分为ABC三组,麻醉后分别超声引导下瘤内局部注射50 μL PBS、PLGA-20％ Fe及DOX/PLGA-20％ Fe,注射后均放入AMF中2 min；治疗后1d,随机从每组选择3只裸鼠处死,取出肿瘤行HE染色,每日肉眼观察其余裸鼠肿瘤生长情况以及体重变化情况.结果 体外加热显示,50μl遇水发生液固相变后的不同Fe含量的DOX/PLGA-Fe在AMF中温度逐渐升高,以Fe含量20％的DOX/PLGA-Fe温度升高显著,能在60s时达到(54.0±1.5)℃,而Fe含量为1％和10％的DOX/PLGA-Fe在60 s时仅能达到(38.3±1.7)℃and (22.7±2.5)℃.消融离体牛肝实验表明,将含有50 μL DOX/PLGA-20％Fe的离体牛肝暴露于AMF中2 min,其凝固性坏死面积为(7.03±0.76)mm3.体外磁热药物控释实验表明,置于pH 5.0 PBS合并AMF组1d后DOX总释放量大约是80％,而不暴露于AMF的pH 5.0组,DOX总释放量仅为50％；倒置荧光显微镜观察得出,红色荧光强度随着磁加热时间的增加而增强.根据体外实验结果,体内治疗方案为50μl DOX/PLGA-20％Fe、AMF加热2 min,能使体积为0.9 cm×0.8cm×0.6 cm的肿瘤不完全消融从而有周围残余癌组织,B、C两组HE染色显示,消融与未消融组织之间有明显界限,消融组织呈凝固性坏死征象,肿瘤细胞正常形态消失,出现核固缩或消失,且B、C组之间残余癌组织细胞未见明显区别；肉眼观察治疗后4d,第3组肿瘤组织脱落,结痂,约7d创面愈合,肿瘤组织消失.B组中残余肿瘤随时间而逐渐增大.结论 本实验制备的DOX/PLGA-Fe在外加磁场的感应下,能减少化学治疗的副作用,增加小剂量磁热治疗肿瘤的有效性,局部热疗联合化疗协同治疗肿瘤,且肿瘤无复发.