【摘 要】
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目的：探讨创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡的变化规律及其与caspase-3基因表达的关系。 方法：SD大鼠随机分为对照组、损伤组和抑制物组。Feeney法致伤，抑制物组伤后脑内注射
【机 构】
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苏州大学附属第一医院急救中心 (苏州 215006)
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目的：探讨创伤性脑损伤(TBI)后神经细胞凋亡的变化规律及其与caspase-3基因表达的关系。
方法：SD大鼠随机分为对照组、损伤组和抑制物组。Feeney法致伤，抑制物组伤后脑内注射5μg caspase--3抑制剂z-DEVD-fmk。分别在伤后1、6、24、48 h和3、7、14 d处死采集伤灶中心皮质、皮层下白质、海马、齿状回，以及对侧相应部位脑组织，应用TUNEL法和流式细胞术检测神经细胞凋亡的变化;免疫组化法、蛋白印迹(western blot)和半定量逆转录.聚合酶链式反应(RT-PER)，检测caspase-13蛋白和mRNA的表达;并借助荧光分析试剂盒检测caspase-3活性的变化。
结果：伤后伤侧各脑区神经细胞凋亡指数(AI)和细胞凋亡百分率(AP)迅速增高，24～48 h达峰值，随后逐渐下降，但伤后14 d仍高于正常(P＜0.01)。伤后caspase-13蛋白和mRNA的表达明显增加，caspase-3活性迅速上升，峰值在240～48 h。其中伤后24h伤侧海马区caspas-3蛋白谱密度与对照组相比增加1484％，caspase-3 mRNA的表达量增加1043％，caspase-3活性增加148％;伤后48 h伤灶皮层下白质caspase-3蛋白谱密度增加1690％，caspase-3mRNA的表达量增加1181％，caspase-3活性增加183％。Westem blot显示，伤后caspase-3原酶及p17活性亚单位的表达均增强。抑制物组caspase-3蛋白和mRNA的表达均明显下降，caspase-3活性明显降低;同时，AI值和AP值也明显降低。
结论：急性TBI后神经细胞凋亡的发生与caspase-3的激活有关;神经细胞凋亡与其调节基因caspase-3的表达间具有一致性，TBI对caspase-3的调节发生在转录水平前的某一环节。caspase-3抑制剂能有效地阻断TBI后的神经细胞凋亡。
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