【摘 要】
：
为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法，以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体，p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心EusA(DAs-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML，且与禽类常见的病毒(IBV，MDV，ILTV等)无交叉反应。动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会
论文部分内容阅读
为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法，以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体，p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心EusA(DAs-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML，且与禽类常见的病毒(IBV，MDV，ILTV等)无交叉反应。动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品，与PCR方法符合率分别为96.5％和93.8％。结果表明，该方法具有方便、快速、敏感等优点，该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。
其他文献
RNAi(RNA interfererice)已成为特异抗病毒治疗研究的热点，但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siNl和siN2)在细胞中的表达水平，设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的siRNA特异茎环引物(SLP-N1-6和SLP-N2-8)，成功地建立了最优的siNl和s
为评价猪圆环病毒(PcV)2a／2b两种基因型毒株及其重组cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果，本研究采用PCV2a-LG和PCv2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗，及其重组杆状病毒表达的2种C印蛋白(PCv2a-rap和PCv2b-rap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB／c鼠165只，随机分成11组，每组15只，用上述4种疫苗各免疫2组，以Pcv2a或Pcv2b毒株攻毒。攻毒后，所有鼠均未见
将纳米PCR技术引入非洲猪瘟病毒(AsFV)检测，建立了ASFV病毒高效纳米PCR检测方法。使用该方法同时检测大肠杆菌(E．coli)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒II型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRsV)、猪捷申病毒(PTV-8)、猪脑心肌炎病毒(EMCV)，结果只有ASFV病毒中P54基因扩增出552bp的目的片段。敏感性表明比普通PCR对照实验结果
为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)cap蛋白用于单克隆抗体(MAb)的制备，以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板，用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa)，引物两端设计了salI和Not I酶切位点，将PcR产物克隆到pGEx-6P-1载体，构建的重组质粒命名为pGEx-TTV1-ORF
通过重叠延伸PCR(SOE-PcR)方法扩增猪细小病毒BQ-C株的NS2、NS3基因，并将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)上，分别构建出重组表达质粒pEToNS2、pET-NS3。用不同浓度的IPTG进行诱导表达，SDS．PAGE分析表明pET-NS2重组蛋白在IPTG浓度为1．2 mM、温度为37℃、诱导4 h时表达量最大，分子量为25 ku；pET-NS3重组蛋白在IPTG浓度为1 m
为建立猪肺炎支原体(Mhp)显色原位杂交(CISH)定位检测方法，为本研究利用地高辛标记的MhpP36核酸探针和DAB／H2O2显色系统，对人工感染组、自然感染组和健康对照组的实验猪肺样品和临床样品进行显色原位杂交检测。结果显示，设计的地高辛标记探针针对Mhp具有特异性，而与其他的猪病原菌无交叉反应；检测结果可以通过显微镜观测到Mhp定位在支气管／细支气管黏膜表面。此外，人工感染组、自然感染组和健
为了建立稳定的猪血管内皮细胞系，为猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型，本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞，G418或嘌呤霉素筛选阳性克隆，并进行细胞传代研究和细胞形态学及表型鉴定。分别获得了两种方法建立的永生化猪血管内皮细胞系SUVEC-hT和SUVEC-ST。两种细胞系均呈铺路石样单层排
为了自新型甲型H1N1(2009)于2009年在世界多个国家暴发流行后，许多国家的猪群中也检测到该病毒的存在。猪作为流感病毒的”基因混合器”能够产生具有潜在危害的毒株。WHO、OIE和FAO联合要求加大对猪群中新型甲型H1N1(2009)的检测和监测，因此建立快速准确的新型甲型H1Nl检测方法成为迫切需求。本研究借助普遍使用的rRT-PcR技术，针对新型甲型H1N1(2009)病毒NA基因设计特异
为了解析基因型相同但宿主来源不同的新城疫病毒的全基因组差异。本文采用RT-PCR方法分别获得4株(JS／3／09／Ch，ZJ／3／10／Ch，AH／2／10／Du，JS／9／08／Go)Class I基因3型病毒的全基因组核苷酸序列，并与GenBank中已公布的Class I基因3型病毒全基因组序列进行比对分析。本实验4株病毒的基因组长度均为15198bp，在基因组1607-1608位有6碱基的缺
根据Ⅶ型新城疫病毒基质蛋白基因保守序列设计并合成特异性引物，建立快速检测Ⅶ型新城疫病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆Ⅶ型新城疫病毒M基因靶序列并将其连入T-Easy载体，制备阳性标准品，优化反应条件，以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线，其相关系数为0．999。检测结果显示。该方法的灵敏度可达lO°copies／μL。而且特异性良好，除Ⅶ型新城疫病毒外，对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅸ型