目的 FOXO1功能多种多样,在脑内广泛表达,在神经系统亦起到重要的作用,为了研究FOXO1受microRNAs调控的机制,为其功能研究打下基础,本实验即进行了相关研究。方法在targetscan网站找到miR-223与FOXO1的结合位点,通过双荧光素酶试验验证其调控关系,利用酶标仪检测转染前后酶活性变化。为了进一步探讨miR-223的变化是否影响到FOXO1的表达,在肝细胞癌细胞HuH-7中转染质粒miR-223和其对照质粒pII3.7,通过RT-PCR技术检测miR-223在细胞株中的表达水平,通过定量real-time PCR和western blot技术检测FOXO1 mRNA和蛋白质在细胞中的表达水平。FOXO1的细胞内定位决定其转录活性的发挥,因此通过免疫荧光实验检测FOXO1的细胞定位,并且利用Image J软件分析实验组与对照组在胞浆与胞核信号强度的变化。结果 Targetscan网站发现miR-223的种子序列与FOXO1 mRNA的3’UTR部分碱基可以互补配对,并且物种间的保守性较高;双荧光素酶试验发现,转染质粒miR-223组较EV组细胞海肾荧光素酶与萤火虫荧光素酶活性之比降低。在转染质粒miR-223的HuH-7细胞中,miR-223表达高于EV组,并且FOXO1总mRNA和总蛋白质表达水平降低。免疫荧光实验发现miR-223组细胞胞浆内的FOXO1荧光信号低于对照组,胞核FOXO1荧光信号高于对照组,利用Image J软件分析亦得到相同的结果。结论 MiR-223通过作用于FOXO13’UTR直接调控FOXO1的表达水平及细胞内定位。