论文部分内容阅读
目的 研究醛糖还原酶抑制剂依帕司他和杜仲木脂素对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化及分化后细胞外基质分泌的影响,为其应用于糖尿病肾病肾间质纤维化防治提供理论基础.方法 将HK-2细胞在体外与高糖、高糖+不同浓度依帕司他、高糖+不同浓度杜仲木脂素共同培养48 h后,采用倒置显微镜观察细胞形态学的改变；采用Real-time PCR法检测反映转分化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素(E-cadherin)及反映细胞外基质分泌指标胶原蛋白Ⅰ(Col Ⅰ)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达水平；采用Western blot法检测α-SMA,E-cadherin,Col Ⅰ,FN蛋白表达水平.结果 (1)高浓度葡萄糖可诱导HK-2细胞形态由鹅卵石铺路石样向梭形长条样转变,醛糖还原酶抑制剂依帕司他和木脂素可明显抑制高浓度葡萄糖诱导的细胞形态学改变.(2) α-SMA,E-cadherin,FN和Col Ⅰ mRNA对葡萄糖诱导具有时间浓度依赖性.其中α-SMA在50 mmol·L-1培育48 h增加最明显,而FN,Col Ⅰ的增加则以20 mmol· L-1培育48 h最显著.(3)分别加入1,10mol·L-依帕司他,α-SMA mRNA分别为：2.01±0.28和0.93±0.37,与对照组(2.38±0.26)相比,表达降低,差异具有统计学意义(P =0.036和P＜0.001)；0.1,1,10 mg·L-1木脂素能降低α-SMA mRNA表达(2.19±0.33；1.93±0.98；1.57±0.94),与对照组比较,差异没有统计学意义.(4)分别加入1,10 μmol· L-依帕司他后E-cadherin mRNA分别为：2.71±0.86和1.97±0.67,与对照组(0.94±0.42)相比,表达升高,差异有统计学意义(P=0.007和P=0.033)；木脂素0.1,1和10 mg·L-1 E-cadherin mRNA分别为：1.77±0.37,2.63±0.41和3.61±1.05,与对照组相比,表达升高,差异有统计学意义(P=0.026、P＜0.001和P=0.004).甘露醇50 mmol· L-1能显著升高α-SMA (2.88±1.30,P=0.016)、E-cadherin(2.00±1.29),Col Ⅰ(1.62±0.33,P=0.019),FN (2.10±1.11,P=0.036) mRNA表达水平,与对照组相比,差异具有统计学差异.结论 依帕司他及木脂素能拮抗高糖诱导的HK-2细胞的转分化,其机制可能与抑制醛糖还原酶有关.