PRRSV 非结构蛋白Nsp4 具有3C 样丝氨酸蛋白酶活性(3CLSP),该蛋白的主要功能是裂解病毒编码的前提多聚蛋白生产对病毒复制过程中起着重要作用的结构蛋白.因此nsp4 在PRRSV 的生命周期中起着决定性作用.为了更近一步研究nsp4 的生物学功能,本研究根据PRRSV TA-12 毒株序列,设计并合成用于扩增TA-12 毒株nsp4 基因的引物,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET28a-Nsp4.酶切测序鉴定以后,将pET28a-Nsp4 转化到表达菌株Transetta(DE3)中,诱导表达重组蛋白,Western Blot 显示nsp4 在大肠杆菌中高效表达,并且具有良好的反应原性,利用镍离子亲和柱纯化获得高纯度的可溶性的重组蛋白,将纯化的nsp4 蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.建立了针对于nsp4 蛋白的抗体检测ELISA 方法.