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目的 建立Aβ25-35 致PC12 细胞损伤模型基础上,观察桑椹提取物(ME)的保护作用并确定其有效剂量；应用基因芯片技术筛选ME 干预Aβ25-35 致PC12 细胞损伤的差异表达基因并加以验证,阐明ME 神经保护作用的分子机制.方法 ①培养PC12 细胞,用不同浓度的Aβ25-35 处理细胞24h,采用MTT 法确定Aβ25-35 的损伤浓度.②用不同浓度的ME 预孵育细胞24h,再给予20μmol/L Aβ25-35 继续损伤24h,采用MTT 法筛选ME 的干预剂量.③DCFH-DA、Hoechst33342 染色法分别检测细胞内ROS 含量、细胞凋亡.④基因芯片技术检测全基因组范围基因mRNA 表达水平的变化,筛选出ME 作用的差异表达基因,并对基因群特异性的变化特征和规律进行描述.⑤采用RT-PCR 和Western blot 技术验证芯片结果 筛选出的目的 基因.结果 ①Aβ25-35 浓度达20μmol/L 时,细胞存活率为(49.79±14.16)％,接近半抑制率值,可作为损伤浓度.②ME 对Aβ 25-35 致PC12 细胞损伤具有保护作用,其有效浓度为100μg/ml、200μg/ml.③与对照组相比,Aβ25-35 组细胞内ROS 的生成显著升高、细胞凋亡率明显增加(P＜0.05)；与Aβ25-35 组相比,200μg/ml ME 预孵育组细胞内ROS 的生成显著减少、细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).④基因芯片共分析了24,358 个基因.结果 显示,与对照组比较,20μmol/L 的Aβ25-35 组中5 个基因上调,16 个基因下调；与Aβ25-35 组相比,200μg/ml ME 干预组中55 个基因上调,98 个基因下调；经聚类分析,聚簇的基因共144 个；根据Gene Ontology(GO)功能分析,所筛选出的差异基因主要涉及细胞粘附、肽酶活性、细胞因子活性、离子结合活性及调节血管生成等功能；结合NCBI 相关数据库发现：在筛选出的差异基因中基因Apaf1、Bace2 和Plcb4 不但在“Alzheimer's disease pathway ”中富集,而且ME 干预后其基因表达水平均明显下调.⑤RT-PCR 结果 显示,20μmol/L A β25-35 处理PC12 细胞24 后,Apaf1、Bace2 及Plcb4的 mRNA 表达明显增加(P＜0.05)；200μg/ml ME 预孵育能显著抑制Aβ25-35 诱导的Apaf1、Bace2、Plcb4 mRNA 表达的上调,(P＜0.05).与对照组比较,Aβ25-35 组BACE2 蛋白表达明显上调(P＜0.05)；ME 预孵育后不能有效抑制Aβ25-35 诱导的BACE2 蛋白表达的上调(P＞0.05).结论 适宜剂量的ME 对Aβ 25-35 致PC12 细胞损伤有明显的保护作用,其机制与抗氧化、抑制凋亡以及调控Apaf1、Bace2 和Plcb4 等AD 相关基因表达有关.