两种病毒RNA提取试剂对甲型流感病毒的灭活效果研究

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目的测试两种常用的病毒RNA提取试剂(硅胶柱法和改良异硫氰酸弧法)灭活甲型流感病毒的能力,以评估在低防护区操作甲型流感病毒核酸提取过程的可能性。方法根据试剂盒操作指导分别用两种提取试剂的裂解缓冲液Buffer AVL(德国QIAGEN)和MGTC溶液(广州华银)处理—甲型流感病毒(105.67TCID50/ml);系列对数稀释病毒处理液后接种于MDCK细胞单层进行分离培养;倒置显微镜每日观察细胞生长状态,出现75%以上病变后收获培养物进行血凝实验测定。同时设置试剂对照以了解试剂的细胞毒性,病毒对照以确定病毒的感染能力。结果未稀释和10倍稀释的两种裂解缓冲液都可引起MDCK大范围死亡,两病毒对照感染细胞的终点稀释度都为100,而所有10,稀释度以上的病毒处理液培养孔细胞生长良好,血凝实验阴性。结论两种病毒RNA提取试剂可以完全灭活高滴度的甲型流感病毒,标本裂解处理后可在低防护区域操作。
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