【摘 要】
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选用海兰褐蛋鸡为实验材料,饲养在山东农业大学动物科技学院试验鸡场,随机选取3只成年鸡,采集下丘脑、心、肝、脾、肺、’肾、腺胃、肌胃、胰脏、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、胸肌、腿肌、卵巢、腹脂等17种组织,放于液氮中速冻后转至一80℃低温冰箱保存备用。根据CLOCK基因mRNA序列设计特异性引物,使用TRIZOL法提取所采集的17种组织的总RNA。以反转录所得cDNA为模板,进行RT-PCR,检测蛋鸡
【机 构】
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山东农业大学动物科技学院,山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室,山东泰安271018
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选用海兰褐蛋鸡为实验材料,饲养在山东农业大学动物科技学院试验鸡场,随机选取3只成年鸡,采集下丘脑、心、肝、脾、肺、’肾、腺胃、肌胃、胰脏、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、胸肌、腿肌、卵巢、腹脂等17种组织,放于液氮中速冻后转至一80℃低温冰箱保存备用。根据CLOCK基因mRNA序列设计特异性引物,使用TRIZOL法提取所采集的17种组织的总RNA。以反转录所得cDNA为模板,进行RT-PCR,检测蛋鸡不同组织mRNA表达。根据β-actin序列设计一对引物作为对照。扩增片段经琼脂糖凝胶电泳,然后用ImageJ分析各组织间的相对表达量。建立了半定量RT-PCR反应条件,从17种组织中均扩出CLOCK基因的目的片段,但在各种组织中表达量不同。由结果可知,β-actin在各组织中的扩增比较一致,是较理想的内参,CLOCK基因在不同组织中的扩增效果表现出较大差异。ImageJ分析结果表明,CLOCK基因在心、肝、十二指肠、盲肠、肌胃、下丘脑中表达量较高;肺、胰脏、胸肌、腿肌、脂肪中表达中等;在脾、肾、空肠、回肠、腺胃、卵巢中表达量较低。急本CLOCK基因作为与生物节律相关的基因,研究发现与不孕不育、肥胖及脂肪代谢异常、高血压疾病、糖尿病、性心肌梗塞等多种疾病的病理过程高度相关。
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试验鸡群来自安徽省农科院畜牧所试验鸡场饲养的黄山黑鸡共计125只,翅下静脉采血抗凝后使用酚氯仿法抽提总DNA。根据王晓亮等(2010)的研究合成引物进行PCR扩增,上游引物序列为:GCATCACCTGTGGTGT-GGT,下游引物序列为:CATGGTTGGCTTCTCCAACT。扩增后的产物用Bsrj内切酶65℃酶切12小时,琼脂糖电泳检测酶切产物,分析其基因型。计算该群体T329S位点基因型频率
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