论文部分内容阅读
研究背景:原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是目前世界上发病率极高的一种恶性疾病。研究显示,在中国,每年HCC死亡病例占到了全世界致死病例的50%以上。中国人群中高发肝细胞癌的主要由于乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染,肝脏产生慢性炎症损伤,进而逐步发展为HCC。目前广泛采用的利用人肝癌细胞系建立荷瘤小鼠模型的方法存在缺点,该模型不能完全反映临床上人肝细胞癌的许多生理特性。研究目的:我们采用从临床新鲜分离得到的HCC肿瘤组织,对NOD-SCID品系的免疫缺陷鼠进行荷瘤尝试,以建立起更加贴近临床病人真实生理状况的动物模型,用于对HCC的体内研究。方法:将临床病人手术切除得到的肝癌肿瘤组织切碎后1:1(V/V)与基质胶进行混合,再将混合物以0.2 ml/只的剂量注射到NOD-SCID小鼠腹部皮下。筛选荷瘤成功的小鼠,待肿瘤组织达到适宜大小后,收获肿瘤组织,按如上方法处理肿瘤组织,再以相同剂量注射至下一批NOD-SCID小鼠皮下。将肿瘤组织在小鼠皮下传经三代,收获的肿瘤组织相同方法处理后,再将混合物以0.02 ml/只的剂量注射到下一批NOD-SCID小鼠肝左叶中。对于每代荷瘤成功小鼠中收获的肿瘤组织留存部分制成病理切片,利用免疫组化检测人肝癌干细胞标志分子h-CD44、h-CD90的表达情况,以确定收获的肿瘤组织与人肝癌组织是否具有高度相似性。结果:通过对11例人来源肝癌组织的荷瘤尝试,目前建立起2例成功荷瘤的人源组织荷瘤小鼠模型(patient derived xenograft,PDX)。免疫组化的结果证明,从小鼠体内收获的肿瘤组织中有人源CD44、CD90的表达,说明所得到的肿瘤组织与真实临床上的肝癌组织具有高度相似性。结论:我们利用人来源肝癌组织建立起的PDX动物模型与临床人肝癌组织具有高度相似性,将利用其进行肝癌体内生物学特性的研究。同时我们将利用小鼠肝内收获的肿瘤组织尝试构建肝癌细胞系,以进行体外特性研究