【摘 要】
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目的 优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平.方法 PCR法获得灰色链霉菌海藻糖合成酶基因tres
【机 构】
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山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室,山东济南250101山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖
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目的 优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平.方法 PCR法获得灰色链霉菌海藻糖合成酶基因tres.基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化,并人工合成优化后的基因序列tres1.利用基因工程法分别构建含tres及tres1基因的大肠杆菌表达载体pET-26b(+)-tres和pET-26b(+)-tres1,CaCl2法分别将两个表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞获得表达海藻糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌株,采用IPTG诱导表达,对摇瓶发酵粗酶液进行SDS-PAGE分析及酶活性测定以确定表达水平.结果 1707 bp海藻糖合成酶tres基因共优化碱基序列266 bp,优化后的序列GC含量由65.8％降低至54.8％,密码子适应指数(CAI)由0.37提升至0.97,SDS-PAGE及酶活性分析表明,含pet-26b(+)-tres1表达载体的大肠杆菌基因工程菌株海藻糖合成酶蛋白表达量高,酶活性比含pet-26b(+)-tres工程菌提高54.7％以上.结论 密码子优化可有效提高海藻糖合成酶TreS蛋白在大肠杆菌中的表达,为海藻糖合成酶的异源表达提供了重要参考.
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