实时荧光PCR检测旋毛虫方法的建立与初步应用

来源 :中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ln86119
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根据本实验室前期扩增的各旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计了一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了实时荧光PCR检测旋毛虫的方法。该方法只能在各旋毛虫隔离种DNA样本中检测到荧光信号,对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等DNA检测,不出现非特异性荧光信号;最小检出量为1.32×102拷贝数和10—5条旋毛虫,建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%;对平行复管检测,组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异;对人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠肌肉可在攻虫14d后100%检出,对送检狗肉样品可从压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63个狗肉样本中敏感地检出8个阳性。
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