【摘 要】
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目的 为了解犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)AspAT基因特征及其在虫体的定位,对犬恶丝虫AspAT基因进行了克隆、原核表达和免疫荧光定位分析.方法 从犬恶丝虫成虫转录组数据库中筛选到AspAT基因序列,通过RT-PCR方法扩增AspAT基因ORF框序列并进行生物信息学分析,亚克隆入pET32a(+)载体后进行原核表达,表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后进行Western blo
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物寄生虫病研究中心,成都 611130 四川农业大学理学院,成都 6111
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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目的 为了解犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)AspAT基因特征及其在虫体的定位,对犬恶丝虫AspAT基因进行了克隆、原核表达和免疫荧光定位分析.方法 从犬恶丝虫成虫转录组数据库中筛选到AspAT基因序列,通过RT-PCR方法扩增AspAT基因ORF框序列并进行生物信息学分析,亚克隆入pET32a(+)载体后进行原核表达,表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后进行Western blotting分析；并通过间接免疫荧光观察AspAT蛋白在犬恶丝虫雌虫中的定位分布.结果 犬恶丝虫编码AspAT的基因序列的ORF长度为1221bp,编码406个氨基酸,理论相对分子量45.7318kDa,等电点为8.05,表达的重组蛋白约为66kDa.免疫印迹结果显示AspAT蛋白能被犬恶丝虫阳性血清识别.间接免疫荧光染色结果显示,AspAT在犬恶丝虫的侧索、皮下组织、肌细胞、假体腔壁、子宫及肠上皮细胞、发育的胚胎中均有分布.结论本研究成功克隆和表达了犬恶丝虫AspAT基因,且AspAT分布在雌性犬恶丝虫成虫的侧索、皮下组织、肌细胞、假体腔壁、子宫及肠上皮细胞、发育的胚胎中,为进一步了解犬恶丝虫的生理代谢及犬恶丝虫病的诊断和防控奠定了基础.
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