论文部分内容阅读
目的:观察橘皮素对miR-21的调控作用,同5-FU对结直肠癌细胞的联合效果,及其相关机制探索.
方法:利用荧光定量PCR方法检测30例术前接受或未接受5-FU化疗患者的结肠癌及癌旁标本中miR-21表达及三株常用结肠癌细胞的miR-21表达水平.MTT法检测橘皮素及5-FU对结肠癌细胞的生长抑制作用,基于等效线法的Chou-Talalay模型用于评价橘皮素与5-FU的联合作用.Western Blotting法检测橘皮素作用细胞后miR-21下游蛋白的表达水平.CT-26鼠源性结肠癌移植瘤模型用于评价橘皮素联合5-FU的体内抗瘤活性.
结果:与未接受5-FU化疗患者相比,miR-21在术前接受化疗患者中表达明显较高(P＜0.01),平均上调倍数为6.63;而体外细胞显示miR-21表达水平越高的细胞对5-FU敏感性越低.橘皮素在体外抑制结肠癌细胞生长,同时增强5-FU对结肠癌的生长抑制作用,两药联用发挥协同作用.橘皮素能够显著下调结肠癌细胞中miR-21表达,同时恢复下游靶蛋白PTEN活性,进而阻止Akt磷酸化.体内试验同时验证了橘皮素对5-FU的增敏作用,同时还能避免单独使用5-FU所致的免疫毒性和体重降低.
结论:高表达miR-21降低结肠癌细胞对5-FU的敏感性.体内外实验均验证,橘皮素可以通过下调miR-21的表达与5-Fu联用发挥协同抗肿瘤效果,为临床结肠癌治疗提供新策略.