【摘 要】
:
将PCV2 ORF2基因插入到PRV通用载体pG中,利用脂质体LipofectamineTM2000试剂盒将重组转移质粒pGO与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,通过3轮蚀斑纯化重组病毒。将重组病毒、商品化PCV2灭活苗及DMEM培养液分别免疫6周龄雌性昆明小鼠,4周后加强免疫一次,一免后第八周用PCV2强毒NY株对小鼠进行攻毒。首免重组病毒后小鼠体内抗PCV2的ELISA抗体
【机 构】
:
河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002
【出 处】
:
中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会
论文部分内容阅读
将PCV2 ORF2基因插入到PRV通用载体pG中,利用脂质体LipofectamineTM2000试剂盒将重组转移质粒pGO与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染猪睾丸(ST)细胞,通过3轮蚀斑纯化重组病毒。将重组病毒、商品化PCV2灭活苗及DMEM培养液分别免疫6周龄雌性昆明小鼠,4周后加强免疫一次,一免后第八周用PCV2强毒NY株对小鼠进行攻毒。首免重组病毒后小鼠体内抗PCV2的ELISA抗体水平很低,二免后小鼠PCV2特异的ELISA抗体水平明显升高,并且重组病毒组能够激发PCV2特异的淋巴细胞增殖效应。攻毒试验表明重组病毒组和PCV2灭活疫苗组均能有效抵抗PCV2强毒攻击。
其他文献
牛轮状病毒(BRV)引起的腹泻在新生犊牛最为常见。在病原流行病学调查的基础上进行多价疫苗的研制,是预防和控制犊牛RV腹泻的关键。本文对国内外BRV病原学以及防控措施的研究进行总结,旨在为我国犊牛RV腹泻综合防控措施的建立提供理论和实验依据。指出,怀孕牛产前1~2个月一次接种BRV基因重配二价减毒疫苗,犊牛出生后及时足量地饲喂初乳,可有效预防犊牛的BRV腹泻。
为检测抗粘病毒基因(Myxovirus-resistant,Mx)的抗口蹄疫病毒功能,本研究构建了pEGFP-N1-Mx1真核表达载体,与对照质粒pEGFP-N1转染BHK21细胞,经G418筛选和Western Blot检测,获得BHK21-Mx1细胞系和BHK21-N1对照细胞系,利用免疫荧光技术进行Mx1细胞定位和BHK21-Mx1、BHK21-N1的FMDV感染实验。结果表明,成功克隆了牛
本实验旨在构建A.margihale MSP1α和MSP1β蛋白的原核表达质粒,在大肠埃希菌中表达重组MSP1α和MSP1β蛋白,并对其特性进行初步研究,为进一步探索A.margihale对红细胞致病的分子机制及亚单位疫苗的研制奠定基础。本实验阐明了A.margihale中MSP1α和MSP1β重组蛋白可在大肠埃希菌外膜上获得有效表达,并确认了MSP1α和MSP1β蛋白在侵入红血球过程中起到黏附素
目的:为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门氏菌诱导山羊免疫应答效果。方法:本研究将60只黑山羊随机分为3组即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门氏菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后7d、15d、30d和45d的山羊消化道SIgA含量中,重组细
为分析2012年河南省猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的特异性引物,利用RT-PCR方法,对2012年分离的5株PEDV毒株的S1基因进行扩增、克隆和序列测定,并对其进行遗传进化分析。结果表明:5株PEDV S1基因核苷酸同源性为98.3%~99.5%,氨基酸同源性为97.1%~98.9%。与2012年国内登陆的PEDV流行株相比较核苷酸同源性为97.8%
A cDNA clone of a genotype 4 swine hepatitis E virus (HEV) strain (SAAS-FX17),identified in Shanghai,has been constructed.Capped RNA transcripts were prepared in vitro and shown to be replication-comp
为进一步摸清泰州地区猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)的感染情况及危害程度,控制该病在泰州地区的流行,应用PCR方法对泰州所辖6个市区近两年116份病料进行PCV2的病原学检测。结果总阳性率为53.45%,每个地区都存在一定程度的感染。其中规模化养猪场阳性率为48.33%,散养户阳性率为58.93%。可见,PCV2在泰州地区猪群中普遍存在,应引起注意。
本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示).将SBC插入pMD19-T载体构建了19T-SBC,再用EcoRⅠ/HindⅢ酶切SBC亚克隆至pET-32a(+)构建了重组质粒pET-32a-SBC.将pET-32a-SBC转入
为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249 bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time PCR,来建立定量检测TTSuV1核酸的标准曲线与直线回归方程。结果显示,该方法的线性关系良好,相关系数达0.999以上;最低可检测到至少6.3×101拷贝/μL的核酸模板;重复
本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep和-rRep’蛋白及PCV2-rCap蛋白制备亚单位苗,同时利用PCV2全病毒制备的灭活苗,在相同条件下进行鼠体免疫攻毒试验,旨在比较各自的免疫原性和攻毒保护性。以PCV2-rRep和-rRep’蛋白亚单位疫苗免疫应答结果表明,这2种复制酶蛋白均具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生高水平的抗体滴度,但在鼠体攻毒模型中对PCV2感染无任何保护性,用各自的免