【摘 要】
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采用离心、超滤、硫酸铵沉淀、离子交换层析等方法,对枯草芽孢杆菌工程菌发酵液中的碱性果胶酶进行了分离纯化,并确定了离子交换层系的最佳条件.结果表明,用截留分子量10
【机 构】
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工业发酵微生物教育部重点实验室,工业酶国家工程实验室,天津市工业微生物重点实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457
【出 处】
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第三届全国酶制剂研究开发应用技术研讨会
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采用离心、超滤、硫酸铵沉淀、离子交换层析等方法,对枯草芽孢杆菌工程菌发酵液中的碱性果胶酶进行了分离纯化,并确定了离子交换层系的最佳条件.结果表明,用截留分子量10000 Dalton超滤膜对粗酶液样品进行超滤,回收率达到73.3％,比活力为259.7U/mg；进一步采用分级盐析法,回收率达到62.9％,比活力为1084U/mg,最佳离子交换条件为：0～1.0 mol/LNacl(缓冲体系为Gly-NaOH pH8.6)溶液线性洗脱,DEAE-Sephorose CL-4B阴离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到1230U/mg,最后经Sephadex-G75柱层析,比活力提高到2352 U/mg,纯度为粗酶液12.5倍,回收率21.6％,最后获得的碱性果胶酶经考马斯亮蓝染色,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示其分子量为43 kDa,碱性果胶酶纯度达到电泳纯.
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